WB(Western Blot), 即蛋白印迹或免疫印迹(immunoblotting),是一项在分子生物学、生物化学、免疫学等领域中应用非常广泛的技术。这一技术利用抗体与组织或细胞样品中特定蛋白的特异性结合作用,根据显色条带的位置和强弱实现蛋白鉴定表达分析。WB技术具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的搞特异性和敏感性。选用合适的...
1.显影的原理Western Blot实验的最后一步,是显影。拿到高特异性、低背景的显色图像,这一步至关重要。 显色的原理是实验中的二抗被HRP(辣根过氧化物酶)标记,可采用增强化学发光法(ECL)。ECL灵敏度高、重复性好,是目前主流的WB显色方法。 2.具体显影步骤 ▲(1) 在避光环境中,将 ECL 化学发光试剂 A 液、B...
整个操作在转移液中进行，要不断的擀去气泡。膜两边的滤纸不能相互接触，接触后会发生短路。整体顺序为“黑色电极—海绵—3层滤纸—凝胶—PVDF膜—3层滤纸—海绵—红色电极”。将夹子放入转移槽槽中，要使夹的黑面对槽的黑面，夹的白面对槽的红面。电转移时会产热，在槽的一边放一块冰来降温。一般用60 V转移2...
原因：封闭不够好，一抗浓度高，洗膜时间和次数不够；解决办法：降低一抗浓度，增加洗膜时间和次数；经验：高背景可能是WB中最常见出现的问题，目的条带单一清晰，但是其他地方有弥漫性较为均一的背景（比较连续的）。其实只要注意操作规范就很容易避免。03.非特异性条带 原因：一抗非特异性与蛋白结合；解决办法...
蛋白免疫印迹(Western Blot,简称WB)是一种能够从细胞或组织提取的复杂蛋白质混合物中检测靶蛋白并对其进行半定量的常用实验技术,还可以鉴定和定量蛋白质中翻译后修饰的氨基酸。与蛋白质科学中其他常用的分析技术(如ELISA、IHC、质谱法和显微镜观察等)相比,WB可提供有关蛋白质分子量信息,区分分子量相近的蛋白,适合检测...
本系列推送的第一篇,就从最常用的Western Blot(WB)开始。WB,即蛋白质免疫印迹法,是基于蛋白质SDS-PAGE电泳分离和特异性抗体识别蛋白的特性,通过显色技术以达到检测目的蛋白的技术,广泛应用于定性检测蛋白水平的表达。其实验时间长、操作细节多,从组织研磨...
Western blot(蛋白印迹)作为科研研究中最为平常的实验,却蕴含了很多知识,可谓是小实验里却有大文章。尽管绝大多数研究僧在接触该实验时都会被虐的体无完肤,却也在和WB斗志斗勇的过程中积累了不少经验。正所谓前人种树,后人乘凉,现在小编就把各位前辈做WB的各种...
Western Blot(WB)分析法Western 实验目的 检测目的蛋白的表达情况。 实验原理 Western Blot(WB)采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体上,例如硝酸纤维素薄膜(NC膜),固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽...
荧光的产生与辣根过氧化物酶与二抗结合的量成正比。 反应前 反应后 孵育后,将膜放置于透明保鲜膜中以防止干燥,然后上传到相机拍摄和图像处理。 参考: 1.华美生物 2.bilibili:western blot原理和过程学习 3.巯基乙醇为什么能破坏二硫键? 4.WB各胶的配置...
WB实验简介 WB实验原理 免疫印迹(Immunoblotting)又称为蛋白质印迹(Western Blot,WB),是一种综合性的免疫学检测技术,用于检测细胞或组织提取物中的蛋白表达水平。 这项技术利用待检测蛋白与抗体的特异性结合,测定生物样本中的蛋白水平,已经被广泛应用并得到公认。