一、原理 蛋白质免疫印迹法即Western Blot。 它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法,基本原理是经过 PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分离的蛋白质样品,转移到固相载体例如硝酸纤维素薄膜(NC膜)或PVDF膜上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。 以固相载体...
注意组装转印堆积层时同样需使用玻璃棒擀出堆积层中气泡,避免影响转膜效果。 二、免疫学检测 1、封闭:取膜放入合适的平皿中,使用PBST(含0.05% Tween20的PBS溶液)溶液洗涤3次,5min/次,接着加入5%脱脂奶粉或5%BSA(用量以盖过膜面即可)溶液,4℃封闭过夜。 2、一抗孵育:取膜用PBST溶液洗涤。使用抗体缓冲液稀释...
Western Blot（WB），一般称为蛋白质印迹。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。WB实验流程如图1所示，首先在SDS胶上将蛋白质分离...
1、封闭：取膜放入合适的平皿中，使用PBST（含0.05% Tween20的PBS溶液）溶液洗涤3次，5min/次，接着加入5%脱脂奶粉或5%BSA（用量以盖过膜面即可）溶液，4℃封闭过夜。2、一抗孵育：取膜用PBST溶液洗涤。使用抗体缓冲液稀释一抗，稀释比例参考抗体说明书，一般按1:1000稀释，将膜浸泡在稀释好的一抗中，室温...
SDS-PAGE电泳在上期已详细介绍,本期将详细介绍其余实验步骤及注意事项。 一、转膜 这一步是将蛋白质转移至固相载体上,常用固相材料有NC膜、PVDF膜等。常用湿法或半干法转模。这一实验步骤中要戴一次性PE手套,防止手上的蛋白污染膜。 1、湿转 图2 湿法转印堆积层组装示意图...
WesternBlot 流程 •一、原理•与Southern或Northern杂交方法类似，但WesternBlot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学...
分子生物学方法学介绍|Western Blot实验详解(3) WB大致流程为:SDS-PAGE电泳→转膜→一抗孵育→二抗孵育→显色。SDS-PAGE电泳在上期已详细介绍,本期将详细介绍其余实验步骤及注意事项。 图1 WB实验流程示意图 一、转膜 这一步是将蛋白质转移至固相载体上,常用固相材料有NC膜、PVDF膜等。常用湿法或半干法转模。
【基础实验一篇搞定】蛋白质免疫印迹(Western Blot) WB实验方法 AtaGenix普健生物发布于:湖北省2023.03.16 12:32 +1 首赞 蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB )大概是我们进入实验室学习的第一个大实验,也是最常用的实验之一。虽然很基础,但是却必不可少。尽管WB的原理已铭记于心,但是真的跟着学长学姐一步步学习起...
蛋白质免疫印迹法即Western Blot。 它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法,基本原理是经过 PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分离的蛋白质样品,转移到固相载体例如硝酸纤维素薄膜(NC膜)或PVDF膜上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。