原因1:插拔梳子时,电泳梳子形成的泳道不平整解决方法1:用注射针拨正泳道原因2:凝胶制备不均一 解决方法2:选择合适的制胶试剂盒原因3:浓缩胶电压偏高,导致浓缩效果不太好 解决方法3:降低电泳电压原因4:样本有不溶性颗粒或核酸污染解决方法4:制备样本时离心要充分,去除杂质。实验器材需整洁...
根据情况,结合超声、匀浆等物理方法,配合去垢剂裂解。 超声去除裂解样品中DNA干扰,经过超声处理过的样本得到的结果更清晰。 尽量使用新鲜的样品,新鲜的样品制备提取物背景较低。 细胞组分分离▼▼ 细胞组分分离(cell fractionation )是指把细胞的各种细胞器或不同组成成分分离的过程,方便快速的分离细胞组份用于下游分析。
然而,在进行Western Blot实验时,可能会遇到一些问题,下面列举了一些常见问题及解决方法: 1.电泳条带不清晰或无条带: 解决方法: 检查样品质量,确保待检测样品是可用的,无降解或污染。 调整电泳参数,如电压、电流和时间等,以优化电泳效果。 更换抗体,确认抗体的特异性,避免非特异性结合。 2.膜上背景过重: 解决...
A:对于细胞样本,蛋白的提取方法比较简单,只需要将细胞培养基弃掉,然后利用PBS清洗2-3次,随后添加RIPA裂解液进行冰上直接裂解,离心上清即为蛋白;但是对于植物和动物组织而言,需要将组织分解成较小的组织块,液氮研磨,后续利用RIPA裂解液进行冰上裂解,相对于细胞蛋白的...
膜在实验过程中干过: 实验过程中要切记保持膜的湿润。 检测时曝光时间过长: 减少曝光时间。 Western blot 结果中杂带较多 (multiple/non-specific bands): 目的蛋白有多个修饰位点(磷酸化位点 (phosphorylation site)、糖基化位点 (glycosylation site)、乙酰化位点 (acetylation site) 等),本身可以呈现多条带。
1 样本制备方法选择 基于对细胞、组织中蛋白的研究,则需将蛋白尽可能多的分离出来,并使其完全溶解。溶解的效果取决于裂解、破碎、沉淀、溶解的过程以及去污剂的选择和各种溶液的组成。这一步是Western Blot的关键环节,直接可以决定整个实验的成功与否。 其中破碎...
实验问题案例分析 (一)电泳条带或者整体出现“微笑”形,可能原因主要包括两方面。一是电泳速度过快,可通过减少电压等减慢电泳速度。二是电泳温度过高,使胶变形,可在冷室或者冰浴中进行电泳或者改变电泳pH。 (二)电泳条带出现与 “微笑”形相反的“皱眉”形,可能是由于装置不合适,特别可能是凝胶和玻璃挡板底部有气...
Western Blot实验中常见问题汇总及解决方案~Western Blot免疫印迹简称WB,是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。WB 实验中常会出现各种问题,爱普科学专注于生产免疫组化相关产品多年,对 WB 实验有一定了解,今天跟各位...
在Western Blot实验中，有时我们会遇到白板或条带浅的问题。这可能是由于多种原因造成的，包括抗体浓度不足、一抗或二抗与靶蛋白结合能力弱、显色时间不够长等。为了解决这些问题，我们可以尝试增加抗体浓度、优化一抗或二抗的孵育条件、延长显色时间等方法。通过这些措施，我们通常能够改善白板和条带浅的问题，使...
Western Blot，也被称为蛋白质免疫印迹法，是分子生物学、生物化学和免疫遗传学领域中经常使用的一种实验技术。其核心原理在于，经过PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）处理后的蛋白质样品，会被转移到固相载体上，例如硝酸纤维素薄膜（NC膜）或PVDF膜。这些固相载体通过非共价键的方式吸附蛋白质，同时保留电泳分离出的多肽类型...