western-blot实验步骤 Western,也称Western blot、Western blotting、Western印迹,是用抗体检测蛋白的重要方法之一。可按照以下步骤操作。 1.收集蛋白样品(Protein sample preparation) 使用细胞裂解液,对贴壁… 科研助手打开知乎App 在「我的页」右上角打开扫一扫 其他扫码方式:微信 下载
答案:免疫印记技术(Western blot)的实验步骤如下: (1)蛋白质样品的制备:提取待测蛋白质,进行SDS-PAGE电泳; (2)转膜:将电泳后的蛋白质转移到硝酸纤维素膜上; (3)封闭:用脱脂奶粉或BSA封闭膜上的非特异性结合位点; (4)抗体孵育:将膜与特异性抗体孵育,形成抗原-抗体复合物; (5)洗涤:洗涤去除未结合的抗体;...
(3) 按照每块 5 mL 配制分离胶 (1 mm 厚度),轻轻混匀后立即铺板;(SDS-PAGE 凝胶配方详见“怎么做 Western blot? 看这一篇就够了!”)(4) 铺板后用异丙醇将分离胶液面压平;(5) 凝固 40 min 后,吸干异丙醇。用 ddH2O 轻轻冲洗并吸干;(6) 按照每块 1.5 mL 配制浓缩胶,并插上合适大小的梳子,注意操...
1 . 将膜用TBS从下向上浸湿后，移至含有封闭液的平皿中，室温下脱色摇床上摇动封闭1h。 2. 将一抗用TBST稀释至适当浓度(在1.5 ml离心管中);撕下适当大小的一块儿保鲜膜铺于实验台面上，四角用水浸湿以使保鲜膜保持平整;将抗体溶液加到保鲜膜上;从封闭液中取出膜，用滤纸吸去残留液后，将膜蛋白面朝...
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一、转膜 这一步是将蛋白质转移至固相载体上，常用固相材料有NC膜、PVDF膜等。常用湿法或半干法转模。这一实验步骤中要戴一次性PE手套，防止手上的蛋白污染膜。1、湿转 （1）转印缓冲液：Tris 5.8g、甘氨酸2.9g、10%（v/v）甲醇、SDS 0.37g、甲醇200ml使用蒸馏水定容至1L，pH 8.3，4℃保存。（2）...
实验步骤 1.准备样品，进行SDS-PAGE 聚丙烯酰胺凝胶电泳，电泳后不要染色，直接进行转膜。2.转膜：转一张膜需准备 6 张 7.0～8.3 cm 的滤纸和 1 张 7.3～8.6 cm 的硝酸纤维素膜。将切好的硝酸纤维素膜置于转膜液中浸 20 min才可使用。在加有转移液的搪瓷盘里放入转膜用的夹子、两块海绵垫、一支...
结合上的抗体与辣根过氧化物酶标记的二抗 进行结合经ECL发光试剂显影、显示与抗体特异结合的靶蛋白条带。 Western Blot实验步骤包括:提取总蛋白、测定蛋白含量,制备SDS-PAGE胶,蛋白样品变性、电泳,凝胶转膜,封闭(室温1小时),一抗反应(4°C过夜),二抗反应 (室温1小时),ECL显影,结果分析。
Western blot实验流程Wes 一.仪器及器皿:棕色广口瓶5个(50ml),灭菌,烧杯3个灭菌,EP管,枪及枪头,分光光度计,超声破碎机,冷冻离心机,灭菌0.9%生理盐水,冰,灭菌水(1000ml),两套灭菌器械。 二.药品配制: 1.TBS×10(Tris Buffered Saline): 2.42 g Tris base...