可能导致一些偏差,所以不太适合精确定位蛋白——不过多数情况下Marker的条带未必能和我们的目标蛋白完全一样,我们得到的也不过是一种相对Marker指示的参考大小,最后都需要Western来定性,所以如果不是要区分大小相近的条带,预染Marker还是很好用的,而且也可以和未染色的蛋白标准一起使用。
marker应该在转完膜孵育抗体之前就可以看到是否成功转至膜上了。在显影时，如果用的是带有CCD相机的仪器...
03 点样时加入 Marker 做磷酸化蛋白 Western blot 时，除了目标蛋白的条带以外，往往会出现非特异性的条带。如果磷酸化抗体不佳，甚至只有非特异性的条带，而没有目的条带。所以点样时需同时加入合适分子量范围的 Marker，根据 Marker 进行比对，查看条带的分子量，是否是目的条带。否则有可能会误以为一些非特异...
所有预染蛋白Marker的表观分子量都会因缓冲条件的不同而发生变化，所以应根据所用凝胶体系使用相匹配的表...
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我习惯先上蛋白Marker,再上蛋白样品,蛋白上样前确保样品完全解冻和充分振荡(推荐使用振荡器振荡),吸的时候没有拉丝即可,建议上样前五分钟把样品从冰上取出来,不然样品中SDS可能会结晶析出,从而影响电泳效果。上层胶80V 25-30分钟,下层胶120V 60-65分钟。以下是正常电泳示例:...
蛋白转移不到膜上，但胶上有，同时Marker 转上去了。为什么？答：可能是：a)样品浓度过低；b)转移时间不够。12 磷酸化抗体的检测样本制备时是否一定要加NaF等？答：NaF是一种广谱磷酸化酶的抑制剂，一般最好加。但是不加也可以，大部分时候是不用加的。13 要验证某个细胞上有无该蛋白的存在，需要做免疫组化...
但有些分子量范围较广的marker,比如说6-250kDa,虽然说它范围很广,可中间的蛋白分子量并没有区分的很细,只适用于大分子或小分子蛋白,而对于30-70 kDa的蛋白并不是很适用。 2. 电泳条件 个人使用的条件一直是80V,300mA跑浓缩胶,120V,300m...