可能导致一些偏差，所以不太适合精确定位蛋白——不过多数情况下Marker的条带未必能和我们的目标蛋白完全一...
1.膜转移效率不足: 如果膜转移效率不高,可能会导致marker颜色浅。这可能是由于电转膜的电压或时间设置不当,或者使用的膜与蛋白质的亲和力不足。 2.样品过载或电泳条件不当: 如果样品加载过多或电泳条件不适宜(如电压过高或运行时间过长),可能导致蛋白质条带在凝胶中迁移不均匀,导致转膜后条带模糊或“飞了”。
Marker条带跑不出或者大条带消失原因一种是Marker本身降解,一种是电泳过程中降解。如果本身降解,电泳一开始应该就是模糊或者条带缺失的。如果是电泳过程中降解,是刚开始有,跑着跑着大条带消失。电泳过程降解,多是因为外槽电泳液加的非常满,和内槽液直接连通,导致短路,或者电极老化短路导致。 2 小条带弥散或者消失...
但预染marker价格较贵，染料的添加可能影响蛋白迁移率，并改变印迹过程中吸附到膜上的能力因此，预染marker...
（3）小分子蛋白由于弥散拖尾现象较多，最好是保留3个以上marker，或者做全膜，避免蛋白被裁去。推荐产品助力您的实验：参考文献：[1] Schägger H, von Jagow G. Tricine-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1 to 100 kDa. Anal ...
图1:赛默飞marker示意图 (左:常规蛋白marker;右:小分子蛋白marker) 3. 电泳:浓缩胶部分设置恒压70V、30min左右,一般即可浓缩到一条线上之后调大电压至110V,至所需蛋白区域全部分开为止。尽量避免长时间低电压跑胶,易导致蛋白弥散过多。同时整个电泳过程中注意降温。
2)上样顺序及速度也是关键,上样时间过久很容易造成蛋白样本的弥散,直接宣告实验的失败,因此,上样速度一定要快,切忌磨磨蹭蹭,此外,建议按照空孔中的loading buffer→蛋白Marker→实验样本的顺序进行加样,以防蛋白弥散; 3)加样时一定要小心,将枪头轻轻抵住长短玻璃板之间的间隙匀速排样,样本会在loading buffer的协...
蛋白电泳时,溴酚蓝跑的很快,而marker分的很慢,同时小分子量的都弥散,想问问哪方面原因hc-materialgyesang
对策:加样体积根据样品浓度和凝胶厚度灵活掌握。一般上样体积为10-15μL(即2-10μg蛋白质)。如果样品很稀上样量可以达到100μL。原因二:样品溶解不完全。对策:(1)样品应该充分溶解:保持各种蛋白质样品和Marker在上样前能够充分溶解,上样前最好离心一下,实在溶解不掉的颗粒就去掉。
150min？没有经过较低电压的压缩胶压缩吗？有可能是初始电压略大、压缩不充分导致的条带弥散。另外，...