如果膜上没有 marker 则为转膜失败。 如果中间出现了细微条带,可能是蛋白上样量太少,或一抗浓度过低。 02 高背景 原因分析: 封闭不充分,一抗浓度过高,洗膜时间次数不够。 解决办法: 降低一抗浓度,增加洗膜时间和次数。 一抗/二抗浓度配比不合适:杂带多,大概率是抗体特异性不好,也有可能抗体浓度太高,可尝试...
9.非特异黑色杂斑 左侧是非特异黑色杂斑结果图、右侧是改善条件之后的结果图 原因及处理对策如下：10....
1. 一抗的非特异结合。建议降低一抗浓度，减少蛋白上样量，或者更换特异性更高的单抗。2. 二抗的非特异结合。不加一抗，仅用二抗做对照，如果出现条带就选择其他二抗。3. 一抗或二抗的非特异结合。建议在一抗或二抗溶液中加入0.1 - 0.5% Tween20，提高洗液Tween20含量（0.1%-0.5%），增加洗膜次数，提高...
如果膜上没有 marker 则为转膜失败。 c. 如果中间出现了细微条带,可能是蛋白上样量太少,或一抗浓度过低。 经验之谈 上图展示一点信号都没有,大部分情况是因为抗体加错了。如果中间出现细微的条带,可能是蛋白上样量太少,一抗浓度过低,ECL 发光液失效。 BOSTER #2/高背景 www.boster.com.cn 原因分析 封闭...
条带不在它预计的位置,比如我的目的条带预计在55kD左右,但是与marker比对后,在蓝色55kD大小的marker平行的曝光条带中并未看到目的蛋白条带,而是在蓝色55kD与40kD之间看到一条较浓的蛋白条带,为了解决这一问题,首先我们应该知道我们是通过蛋白marker来辅助判断目的蛋白条带,所以存在两大关键对象:蛋白marker、上样...
图1:赛默飞marker示意图 (左:常规蛋白marker;右:小分子蛋白marker) 3. 电泳:浓缩胶部分设置恒压70V、30min左右,一般即可浓缩到一条线上之后调大电压至110V,至所需蛋白区域全部分开为止。尽量避免长时间低电压跑胶,易导致蛋白弥散过多。同时整个电泳过程中注意降温。
a)蛋白预染Marker:采用预染色标记可以看见电泳过程中蛋白迁移的距离,为了便于观察电泳效果与转膜效果,以及判断蛋白分子量大小,在电泳时通常要使用预染的蛋白分子量标准。根据待测蛋白的分子量大小,挑选合适的Marker。 b)加入足量的样品:SDS-PAGE根据蛋白电泳迁移率将其分离,迁移率是蛋白大小和电荷的函数。我们建议在预制...
产品名称 biotides 三色预染蛋白Marker WB1902 彩色 WB预染marker 10-250kDa 产品规格 2*250ul 有效成分含量 100% 是否进口 否 用途范围 蛋白分子量标准 包装规格 0.01kg 货号 WB1902 货期 现货 优点 最低可上样1ul,条带清晰可见 分子量 10-250kDa 品牌 biotides 价格说明 价格:商品在爱采购的...
a)蛋白预染Marker:采用预染色标记可以看见电泳过程中蛋白迁移的距离,为了便于观察电泳效果与转膜效果,以及判断蛋白分子量大小,在电泳时通常要使用预染的蛋白分子量标准。根据待测蛋白的分子量大小,挑选合适的Marker。 b)加入足量的样品:SDS-PAGE根据蛋白电泳迁移率将其分离,迁移率是蛋白大小和电荷的函数。我们建议在预制...