RIPA裂解液(Radio Immunoprecipitation Assay Lysis buffer,放射免疫沉淀法裂解缓冲液)。 比如碧云天公司的裂解液: https://www.beyotime.com/product/P0013B.htm RIPA裂解液的配方有很多种,大致可以分为强、中、弱三类。如何选择裂解液,根据实...
ECL 发光,压片 10min,显影 1min,定影 10min,那么在 18:00 之前你就能看到结果了,呵呵,如果结果不好还有后招,用 stripping(一抗二抗洗脱液)洗涤,我用的是碧云天的碱性一抗二抗洗脱液,按照说明书来一般 20min 就行,然后洗涤几次,重新封闭 1h,然后一抗过夜。...
1..将水浴锅的温度调至100℃,等水浴锅达到100℃温度后,取出需要收样的细胞的培养皿或者孔板。 2.将缓冲液(1Xloading buffer)置于100℃水浴锅中预热10min。 (loding buffer: 是5Xloding buffer用纯水稀释到1Xlodingbuffer。厂家:碧云天;货号: P0015L) 3.弃去细胞培养基,用PBS洗两遍。 4.取预热好的缓冲液1...
Urea(7 M)4.2 g,Thiourea(2 M)1.52 g,CHAPS(4% W/V)0.4 g,DTT(1%W/V)0.1 g,ddH2O加至10ml,1ml/管分装-20℃保存备用;1ml分装的裂解液中用前加入Cocktail(1%V/V)10μl,混匀后于冰上放置备用。 我们用的是国产的碧云天的全蛋白提取试剂盒 ...
图片来自碧云天官网 (5)蛋白变性:确定浓度后将所有的蛋白样品稀释至等浓度,按蛋白加入量50 μg计算裂解液加入的体积(裂解液充当稀释液),按蛋白取用量加入4*loading buffer后,用1*loading buffer补齐,充分混匀,放入-80℃备用。(建议每3ul蛋白样品加1ul蛋白上样缓冲液4X(4X Laemmli Sample Buffer),使工作液浓度为...
SDS-PAGE(自己配制,碧云天的试剂盒,P0012A):上样前可用针管吹一吹,避免气泡和多余凝胶堵塞上样孔,以免样品溢出到电泳缓冲液中; 上样前蛋白处理:上样的蛋白样品95-100℃加热5min,12000rpm离心5min(冻存样品会有SDS沉淀析出,影响跑胶结果),吸取上清上样;一般1mm/15孔的梳子,上样10ul;为了区分加样的顺序,mark...
SDS-PAGE(自己配制,碧云天的试剂盒,P0012A):上样前可用针管吹一吹,避免气泡和多余凝胶堵塞上样孔,以免样品溢出到电泳缓冲液中; 上样前蛋白处理:上样的蛋白样品95-100℃加热5min,12000rpm离心5min(冻存样品会有SDS沉淀析出,影响跑胶结果),吸取上清上样;一般1mm/15孔的梳子,上样10ul;为了区分加样的顺序,mark...
我们用的是国产的碧云天的全蛋白提取试剂盒2) 蛋白样品制备(1) 取组织,称重,按照 W:V = 1:6的比例加入蛋白裂解液;(2) 用匀浆器对组织进行匀浆,匀成糊状。(3) 4 °C,冰上放置30mi 2、n,每10 min振荡一次;(4) 4 C, 12000 g离心30 min,吸上清,分装置于-70 C待用。3) 蛋白浓度测定(Bradford法...
是用碧云天5*Loading buffer 按 总蛋白:Loading Buffer=1:4体积混合的,然后100℃ 5min(是按说明书来的)。 3.Western Blot a.配胶 分离胶10% 浓缩胶5% 30%丙烯酰胺 5.0ml 1.0ml 1.5M Tris 3.8ml 1.0M Tris 0.75ml 10%SDS 0.15ml 0.06ml
你好，请问35的皿你提出来的膜蛋白浓度高吗？做WB效果好吗？用胞浆蛋白溶液做内参吗？我刚做的几乎...