总之，在WB实验中，选择适合的HRP底物是实验成功的关键之一。通过了解HRP底物的种类、考虑实验需求、关注性能指标以及选择知名品牌和良好口碑的产品，我们可以更好地为实验选择适合的HRP底物，从而提高实验的准确性和可靠性。
过氧化物酶(HRP)系统的一定要做内源性过氧化物酶的灭活,而对于碱性磷酸酶(AP)系统和免疫荧光这个步骤不需要做。 5.抗原修复 不同的样本、不同的蛋白其最佳的抗原修复方式会有所区别,热修复(酸性修复液(柠檬酸盐修复液)、碱性修复液(EDTA 修复液))及酶修复(蛋白酶)都可做尝试。对于陈旧的样本要增加修复强度,...
高性价比：wb 1:10万的HRP直标标签抗体 ✔ 超高稀释比：WB 1:30000-1:100000; ELISA 1:5000-1:10000 ✔ 操作更简单：无需添加二抗 ✔ 省时又省力：37℃摇床孵育30min 客户反馈 蛋白标签是一些肽类或蛋白，它们与目标蛋白融合表达，方便在下游通过抗体、荧光检测目标蛋白或对目标蛋白进行纯化。常见的蛋白...
ECL发光液:指一种具有较高的化学发光强度的试剂。 一般使用的发光液A和B,在辣根过氧化物酶(HRP)的催化作用下,A液和B液反应生成一种过氧化物,过氧化物不稳定随即分解,形成一种能发光的电子激发中间体,当后者由激发态返回至基态,就会产生荧光。 WB加速神器--SNAP i.d. 2.0 使用WB加速神器--SNAP i.d. 2.0...
6、如果条带中间出现白色（反白），原因为中心部位高浓度HRP把底物消耗过快，中间部位底物消耗结束之后就不发光了，应降低蛋白量，降低一抗和二抗的浓度。7、如果条带很亮且背景高，可以减少曝光时间；如果条带很浅，则可适当增加曝光时间；WB实验显影方法和仪器就讲解到这里了，我们的WB实验合集就讲解到这里了，...
HRP的底物主要包括化学发光底物和生色底物两大类。在选择底物时,我们需要考虑灵敏度、背景干扰以及使用的便捷性和稳定性。生色底物显色是通过底物在HRP和H2O2的存在下失去电子而呈现颜色变化来检测WB结果的。常见的生色底物有DAB、4-CN、CN/DAB、AEC和TMB等。这些生色底物各有特点,例如DAB灵敏度高、特异性好,但...
待目的蛋白和抗体充分结合后,用 TBST 洗脱液洗脱掉多余未结合的一抗,加入带有 HRP 标记的对应二抗,这样,我们的蛋白+一抗+二抗形成一个复合物,加以化学发光液,有靶蛋白的位置就会产生荧光,利用胶片或者化学发光仪就可以显现靶蛋白的条带显现。 WB常规实验流...
WB显影是Western Blot实验的最后一步,其原理是实验中的二抗被HRP(辣根过氧化物酶)标记,通过采用增强化学发光法(ECL)进行显色。ECL的化学发光液主要成分是鲁米诺(luminol)及异鲁米诺衍生物。鲁米诺和H2O2混合后作为底物,可在HRP的作用下发荧光,利用X光片或化学发光成像系统采集图像。 二、WB显...
HRP化学发光是一种基于酶催化反应的化学发光技术,使用过氧化氢、酚类化合物等作为底物,辅以酶标记试剂(被标记物与酶结合后形成化学复合物)和发光底物,在过氧化氢和酚类化合物的催化下,发生化学反应放出能量,从而产生发光。HRP(Horse Radish Peroxidase,辣根过氧化物酶)作为酵素,可催化该催化反应,形成高活性的自由基,...
1.HRP 生色底物 生色底物显色主要是利用底物在有HRP和H2O2的存在下失去电子而呈现出颜色变化积累这一过程检测WB的结果。生色底物主要包括DAB、4-CN、CN/DAB、AEC和TMB等。下面对这4种生色底物从不同方面进行比较。其中,DAB应该是最熟悉的底物,灵敏度高,特异性好,缺点就是需要现配现用,显色后光照数小时会褪...