1.5mol/L Tris(pH8.8)1.32.53.85.06.37.5 10%SDS0.050.10.150.20.250.3 10%过硫酸铵0.050.10.150.20.250.3 TEMED0.0020.0040.0060.0080.010.012 配制12%的PAGE分离胶: 成分所需各成分的体积(ML) 凝胶体积51015202530 蒸馏水1.63.34.96.68.29.9 30%丙烯酰胺混合液2.04.06.08.010.012.0 1.5mol/L Tris(pH8.8)1...
常用的分离胶浓度有6%、8%、10%、12%,分子量越大,所用的胶浓度越低,蛋白电泳速度越快。例如,测定100kDa分子量以上的蛋白可选择8%浓度的分离胶;测定20kDa分子量以下的蛋白可选择15%浓度的分离胶,中间的分子量可选用12%浓度的分离胶。 在Western Blot(WB)实验中,SDS-PAGE分离胶通常根据分子量范围的需求来选择...
不同分离胶的配方见图二,不同分离胶的根据所跑目的蛋白分子量进行选择,主要如下: 6%分离胶,适用75-200kDa 8%分离胶,适用50-150kDa 10%分离胶,适用23-120kDa 12%分离胶,适用18-100kDa 15%分离胶,适用10-40kDa 祝大家科研,多发paper!#科研#研究生日常#研究生#每天学习一点点#技术分享...
下面将介绍WB制胶的配方及其主要内容。 一、聚氨酯 聚氨酯是WB制胶的主要成分之一,其作用是增加胶水的粘度和黏度,提高胶水的粘接性能。聚氨酯的用量一般为10%-20%。 二、丙烯酸酯 丙烯酸酯是WB制胶的另一种主要成分,其作用是增加胶水的粘度和黏度,提高胶水的粘接性能。丙烯酸酯的用量一般为10%-20%。 三、丙烯酸...
1.三层胶 对于分子量小于10KDa的蛋白,可以尝试使用Tris-Tricine胶 (三层胶) 体系。其中间隙胶可以阻挡一些大分子量的蛋白,从而使小分量的蛋白或肽段能够在分离胶内得到更好的呈现。 图Tris-Tricine三层胶示意图 表4 Tris-Tricine-SDS-PAGE配方 2.梯度胶梯度胶是从上至下凝胶浓度逐步升高的凝胶(4-20%),需通过...
1.对于常规大于10kDa的蛋白,一般采用以下不同浓度的SDS-PAGE分离胶配方:10%过硫酸铵母液(质量体积比10%)配好后需4℃冷藏,且建议在1周内使用。2. 40%丙烯酰胺母液和2x分离胶缓冲液配方如下:上样及电泳相关试剂1.4X SDS 上样缓冲液2.电泳前我们需要准备好电泳缓冲液。...
研一新手速成WB 试剂配制 纯干货分享!不同分离胶的配方见图二,不同分离胶的根据所跑目的蛋白分子量进行选择,主要如下: 6%分离胶,适用75-200kDa 8%分离胶,适用50-150kDa 10%分离胶,适用23-120kDa 12%分离 - 科研日记于20230903发布在抖音,已经收获了96个喜欢,来抖音
一、配制步骤 1、安装制胶器 将制胶底板放在水平工作台上，安装制胶底板，插上样品梳；2、凝胶浓度的...
配胶时先配分离胶,后配浓缩胶,不同的胶配方如下: 分离胶的配置 浓缩胶的配置 WB检测步骤 样品处理 若是检测细胞中的蛋白,需要裂解细胞。先将细胞取出,在EP管中离心,3500rpm 5min 4℃,5min后,将上清吸出,加入细胞裂解液,冰上操作,裂解30min。中间每隔10min将细胞混匀一次。30min后将裂解液离心,12000rpm ...