以6%的SDS-PAGE分离胶为例(基于提供的信息片段): - 凝胶体积为5毫升时: - 蒸馏水:2.6毫升 - 30%Acr-Bis(丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的混合液,一般比例是29:1):1毫升 - 4×Tris-HCl-SDS分离胶缓冲液(pH 8.8):2.4毫升 - 10%过硫酸铵(APS):适量(催化聚合反应,用量通常是总量的0.1%) - TEMED(四甲基乙...
书上写丙烯酰胺浓度为10%的胶线性分离范围是20-80k，为什么我用10%的胶跑mark只能跑到35k的样子。以前...
组装制胶装置,将玻璃板卡在制胶架上,底部与海绵胶条贴紧; 02 按照以上分离胶配方配制所需浓度的分离胶(TEMED最后添加),充分混匀后,将分离胶溶液用移液枪小心地灌入组装好的玻璃板中,枪头紧贴玻璃板内壁; 03 在分离胶表面轻缓地覆盖一层ddH2O液封分离胶使表面平整,室温静置凝固约30-60 min; 04 使用以上配...
biorad半干转PDVF膜,15v转30分钟,预染marker全部进膜,转移后的胶考马斯亮兰染,可见残留的蛋白带,大分子量多些.blot时,封闭用5%奶粉TTBS 1小时,抗体稀释液TTBS,一抗(1:10,单抗上清,2000年制备)1小时,二抗(1:2000)1小时
分离胶:用1.5M Tris-HCL 8.8、10%分离胶。(所谓的10%浓度为Acr-Bis的浓度,即丙烯酰胺的浓度,用水定容,其他成分不变);浓缩胶:用1M Tirs-HCL 6.8、浓度:5%。 2、上样电泳: 所用梳子为15孔,Marker占用一孔,故每块凝胶可以检测14支样品。上样量:Marker:5 μl/孔; 样品:20μl/孔;参数:80V,待样品跑出...
科学凝胶艺术：SDS-PAGE与Native-PAGE 使用SDS-PAGE，如同魔法师的变形术，将蛋白分子进行高效变性后，精确按分子量划分界限，清晰展示它们的层次。Native-PAGE则是大自然的忠实记录者，它以电荷和分子量为标准，揭示未经处理样品的真实面貌。凝胶大师的配方：5%与10%浓缩与分离胶 5%浓缩胶如同舞台的起跑线...
不同分离胶的配方见图二,不同分离胶的根据所跑目的蛋白分子量进行选择,主要如下: 6%分离胶,适用75-200kDa 8%分离胶,适用50-150kDa 10%分离胶,适用23-120kDa 12%分离胶,适用18-100kDa 15%分离胶,适用10-40kDa 祝大家科研,多发paper!#科研#研究生日常#研究生#每天学习一点点#技术分享...
首先是配制分离胶,因为分离胶处于底层,需要提前配制,在此以10%的分离胶配制为例,具体配方如表2: 表2 10%分离胶配制不同体积的配制办法 待分离胶凝固后配制浓缩胶,一般需要30min。接着是配制浓缩胶,因浓缩胶处于上层,所以要后配制,一般配制为5%的浓缩胶,具体配制办法见表3。
10% 过硫酸铵溶液(AP): 取0.1g过硫酸铵,加入EP尖管,加入1ml水,混匀,室温放置,避光保存(放在抽屉中)。或者称多少配多少(X mg AP粉末,配成10X μl液体)。注意现用现配,避光保存。不需要配太多,每两块胶只需要75ul的AP溶液。 三、玻璃板的清洗 ...
十二烷基硫酸钠(SDS)是一种阴离子表面活性剂,常用于蛋白质和类脂类的电泳分离,本品是10%SDS,常用于PAGE胶的配制。