A1: 首先检查转膜时间是否足够,以及电压是否适宜。如果条带不清晰,可能需要优化转膜条件,如增加转膜时间或调整电压。此外,确保样品制备条件不会破坏样品的抗原性。Q2: 如何确保转膜过程中没有气泡? A2: 在组装转膜“三明治”结构时,确保滤纸、凝胶和膜之间紧密接触,避免气泡。可以使用刮刀轻轻刮除气泡,并确保转膜夹正确组装。Q3: 转膜过
使用的转膜液为赛维尔快速转膜液,转膜条件为400ma转2小时。6⃣ 电泳前准备 一定要检查电泳夹是否存在漏液的情况,否则等样品加进去就不好挽救了。检查电泳条带是否歪七扭八的跑,除了制胶本身可能存在问题外,大部分原因都是电压问题。如图三是我前面遇到两侧漏液导致跑样成弧形,这个时候不要觉得样品不能用了,重...
你的WB转膜是不是出..经典的转膜方法是电转移,因为电转移需要配套垂直电泳槽来进行。如何做这个“海绵—几层滤纸—胶—膜—几层滤纸—海绵”的“三文治夹心”,在分子克隆上已经有详细的介绍,相信大家都很容易找到。中洪转膜操作实拍图
1.转膜失败 观察预染Marker,没有Marker条带(一条都看不到)可能的原因: ①考虑电极是否插反,若是,需要重新进行电泳及转膜; ②使用的是PVDF膜,要考虑转膜前是否使用无水甲醇进行了活化。 转膜不充分(小条带在膜上,大条带在胶上)的可能原因有: ①转膜时间过短,需适当延长转膜时间; ②出现不均匀转膜,表示膜没...
WB转膜出现以上情况可能是由下面几个因素造成的: 1.膜转移效率不足: 如果膜转移效率不高,可能会导致marker颜色浅。这可能是由于电转膜的电压或时间设置不当,或者使用的膜与蛋白质的亲和力不足。 2.样品过载或电泳条件不当: 如果样品加载过多或电泳条件不适宜(如电压过高或运行时间过长),可能导致蛋白质条带在凝胶...
可能是三明治夹制作不够紧实。做阳性对照,排除转膜问题。🔥曝光后无条带或白板? 转膜可能转反了,观察Marker排除原因。试试黑胶白膜法吧!🔥条带颗粒状看不清? 转膜滤纸可能不平整或掉屑。勤换新滤纸,使用无屑转印棉试试。遇到转膜问题别慌张,逐一排查,解决烦恼!💪0 0 发表评论 发表 作者...
大家好,最近在WB跑胶转膜这一块遇到了不少问题,真是头疼。图一图二是转膜后用考马斯亮蓝染色的情况,有的转得很干净,有的胶上蛋白弥散,甚至有蓝色颗粒。我用的是ACE预制胶(4%-20%),恒压110-120跑(冰浴),转膜恒压100v2h冰浴,0.22um的膜。转完后孵育一抗(武汉三鹰),结果泳道看起来很脏,或者拖尾,有的...
转膜的时候电压40v，可以看到电流先下降后上升。我转膜的时候就这样的，转膜效果挺好的。转膜液随着使用次数增多，电阻增大，相应电流下，电压增大，建议每次转膜液使用2～3次就换新的，这个是正常的，恒压的时候，电流也是会变化的，这是关于电泳液的问题，用的时间久了就会出现这样的问题，可以经常换...
05 WB疑难杂症 经验总结: 1.条带笑了,我哭了…… 可能原因:凝胶聚合不均匀,灌胶时要混合均匀,动作轻缓。 2.背景太深,都是黑黢黢的…… 可能原因:膜或者缓冲液被污染;封闭不充分;检测时曝光时间过长;抗体浓度过高或者抗体与封闭液之间有交叉反应。
4、背景深(1)封闭问题,牛奶液体没有完全覆盖膜;(2)降低一抗浓度,孵育时间;(3)缩短二抗孵育时间;5 、没有条带首先利用丽春红对膜染色,若有条带在,就说明是转膜后面的封闭一抗二抗操作有问题,我们可通过调节后面的实验条件,重新对膜进行处理,最后还是没出不排除一抗有问题;若丽春红染色没有条带,则可以放弃此...