跨膜蛋白WB实验的优化 跨膜蛋白提取需要破坏细胞膜的磷脂双分子层,但不影响蛋白质结构的功能活性。使用洗涤剂、低离子盐(盐析)、剪切力和快速压力变化是富集蛋白质提取物的关键参数。某些参数对提高产量以及改善蛋白质分子的稳定性和完整性非常重要,包括缓冲液的类型、各组分的浓度以及缓冲液的pH值。 特别是Tris
结果凝胶和随后的WB印迹中都找不到跨膜蛋白。所以我们要选择最佳变性温度,既要让它真正变性,又要防止蛋白质聚合、沉淀和丢失。 一般可以加入上样缓冲液,在37°C水浴或金属浴孵育45分钟后上样。如果直接煮沸或用高温变性跨膜蛋白,因为它的疏水性,会倾向于聚合形成二聚体或者多聚体,抗体就识别不了啦。而且多聚体容...
53:35 要是能够提供膜蛋白提取加结构解析服务就更好了 有结构解析服务的需求的话,可以交流交流啊 ...
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