转膜时要使整个电转仪置于冰水混合物中,常用 220 V 或者其他高电压进行; 机器温度升高,会使蛋白降解,也就是转膜后,用丽春红染色发现条带跑糊,发光后条带和背景也会脏的一塌糊涂。 5、孵育抗体 孵育一抗的时间大多会选择 4 ℃过夜,也可以室温封闭 2 小时,...
今天曝光的时候前两条条带的背景都特别脏,和昨天情况一样,(昨天的全脏。还纳闷了很久怎么会出现这种情况)。突然想到我的曝光液是重复用的之前的,立刻去重新配了一个曝光液,再曝就好了❗️因为之前听来一耳朵说配好的曝光液放冰箱下次可以接着用,之前间隔都不久确实没影响,这次超过了三天就不行了。痛定思...
常规或低背景 0.1/0.2/0.45 PVDF 和 NC 膜 Tips: 通常NC 膜可用于 WB,荧光 WB。 而PVDF 膜更多常用于 WB,不用于荧光 WB。 3、更高通量的转印仪 WB 实验的转膜方式主要有湿转和半干转两种,两者原理相同,只是用于固定胶/膜叠层及施加电场的仪器有所不...
原因和解决方案: (1)封闭不彻底:延长封闭时间,4℃过夜封闭可以降低背景;增加封闭蛋白浓度;更换封闭液,推荐使用达领快速低背景封闭液,5～10 min 即可快速高效地完成封闭,有效地降低背景,增强信噪比。 (2)膜或缓冲液污染:拿取膜与吸水纸时要戴手套,尽量避免手与膜直接接触;及时更换新鲜的转膜缓冲液。 (3)膜没有...
1.背景有不均匀的白色斑点 ★ 转膜时膜上有气泡或抗体在膜上分布不均 ˙ 转膜过程中尽量去除气泡,抗体孵育时保持摇动。 换新的三明治滤纸 2.背景有黑色斑点 ★ 抗体结合了封闭剂 ˙ 过滤封闭剂。 3.深背景出现白色条带 (非预期背景) 过爆 体现是中间出现白色 ...
封闭液不完全、蛋白降解。1、封闭液的作用是阻止非特异性结合，封闭液没有完全封闭非特异位点，会导致背景信号的增加。2、蛋白在实验过程中会发生降解，降解产物会引起背景信号的出现。
仪器不干净造成和蛋白降解。1、根据查询丁香通网显示，wb实验室是因为仪器封闭没封闭好，不干净造成的。2、是蛋白降解或者整个实验过程中条件不合适造成的。
解决WB背景脏的方法 如果不想再配一抗二抗,多清洗几次,然后从低到高去使用ecl。 调整一抗浓度,尽量4度过夜孵育,有条件的尽量放摇床上。 二抗太浓也会有很高的背景,降低浓度或缩短孵育时间都可以。 还有一点容易忽视,PVDF膜活化不够,它的吸附能力没有完全激发,也会导致背景高。0...
1、首先,用PS打开需要修改的WB条带图 2、选择左侧工具栏的“魔棒工具”,然后选取WB条带,选定区域后,进行复制(需注意,这里需要根据实际情况调整到合适的容差数值) 3、新建一个画布,然后将复制的WB条带粘贴到新建的画布中 4、重复之前的步骤,将WB条带全部复制到新建的画布中 5、将复制好的WB条带调整至同一高度...
Western-Blot背景太脏 1.你作的是否为磷酸化的抗体,若是,5%脱脂奶粉封闭液会对结果产生影响,这时你可以考 虑用BSA试试; 2. 背景比较高的解决方法:1)降低1、2抗浓度,我们用的晶美的2抗稀释度甚至达到了 1:20,000;2)延长洗膜次数和时间;3)降低曝光时间; 背景过高的解决方法: 1.降低抗体浓度,降低孵育时间...