参照抗体说明书的WB稀释比例，用抗体稀释液稀释好一抗，将膜从封闭液中夹出用滤纸吸去多余液体，放入抗体孵育盒中，倒入稀释好的一抗，过夜孵育。2.8二抗孵育 根据一抗来源选择合适的二抗，参照抗体说明书的WB稀释比例，用抗体稀释液稀释好二抗。将一抗孵育的PVDF膜用TBST洗涤3次，每次5min，将膜从洗涤液中夹出用
(1)玻璃板对齐后放入夹中卡紧。然后垂直卡在架子上准备灌胶。(操作时要使两玻璃对齐，以免漏胶。) (2)按前面方法配10%分离胶，加入TEMED后立即摇匀即可灌胶。灌胶时，可用10 ml枪吸取5 ml胶沿玻璃放出，待胶面升到绿带中间线高度时即可。然后胶上加一层水，液封后的胶凝的更快。(灌胶时开始可快一些...
一、实操详解视频 如果不方便观看视频,可以先收藏订阅「WB 实验专题」哦,更多实验干货集锦,定期更新! 此外,丁香实验还给大家梳理了实验所需材料和步骤的文字详解版本,感兴趣的同学,接着往下看吧~ 二、实验步骤详解 (一) 配胶 1. 洗玻璃板:用洗洁精洗净,再...
将目标蛋白条带发出的信号使用软件进行分析,计算出目标蛋白的相对定量值,即为WB定量。 对WB条带进行定量方法之一是灰度分析,灰度是计算机图像分析仪根据图像颜色深浅分为256个级别。灰度值越小物体颜色越深。 常用的蛋白灰度分析软件有 Image-Pro Plus ,Quantity One ,Image J/fiji。(还有不太常用的还有Gel-Pro An...
尽量全程冰上操作! 1.配置裂解液:蛋白质裂解液mRIPA+蛋白酶抑制剂+磷酸酶抑制剂(按照说明书配),旋涡震荡5秒,然后放在冰上。六孔板每孔200~300ul左右,具体用量还可以参考说明书。 假如不做磷酸化蛋白质,也可以不加磷酸酶抑制剂!初学者...
Day 1: 实验操作步骤 🏭 加样: 洗槽:先洗槽,再上板。 加电泳液:中间加满,周围加到1/4。 加样:2.5 ul的maker,25 ug/孔,根据所提蛋白浓度取量。注意加样时不要太快,不要回吸;上板时要卡住槽缝;取梳子时双手同时操作。 电泳: 电压:80V,2小时(可以根据实际情况调整电压大小,120V或50V)。注意不要...
1.在操作过程中,应注意保持样品和试剂的低温,避免蛋白降解。 2.裂解液的选择应根据样品类型和实验目的进行调整。 3.电泳和转膜过程中,应注意电流和电压的设置,避免过度电泳或转膜不完全。 4.封闭液的选择应根据一抗的来源和类型进行调整,以避免非特异性结合。 5.一抗和二抗的孵育时间和温度应根据抗体说明书进行...
WB实验的基本原理及操作流程如下：基本原理： 蛋白质提取与分离：首先，将蛋白质从细胞或组织中提取出来。 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳：利用SDS作为去污剂和还原剂，通过加热使蛋白质变性并带负电，然后在SDS聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳，使蛋白质根据分子量大小进行分离。 抗原抗体结合：将分离后的蛋白质转移到硝酸...
整个WB操作的流程可以表示为以下几个步骤: 1.初始化操作:网络蜘蛛会首先进行初始化工作,包括配置相关参数、设置种子URL、建立数据库连接等。 2.URL管理:网络蜘蛛会维护一个URL队列,用于存放待访问的URL。它会根据一定的调度策略从队列中取出URL,并加入到已访问的URL集合中。 3.网络请求和响应获取:网络蜘蛛会发送HTT...