操作步骤 1.取出凝胶,根据Marker切下目的条带,用蒸馏水冲洗,并裁剪与SDS-PAGE凝胶相同大小的PVDF膜,滤纸应与纤维垫相同大小; 2.PVDF膜用甲醇浸泡1min后,和滤纸一同浸泡于电转缓冲液中; 3.按照黑色板-纤维垫-滤纸-凝胶-PVDF膜-滤纸-纤维垫-白色板依次放...
完成孵育后，进行洗膜操作。通常使用含有Tween-20的PBS或TBS缓冲液洗涤3次，每次持续5-10分钟。二抗孵育：参照供应商的推荐，将二抗进行适当稀释。将经过洗膜处理的一抗膜与二抗溶液一同孵育，于室温条件下持续30分钟至1小时。孵育完毕后，再次进行洗膜操作，通常使用含有Tween-20的PBS或TBS缓冲液洗涤3次，每次维持5...
(1)玻璃板对齐后放入夹中卡紧。然后垂直卡在架子上准备灌胶。(操作时要使两玻璃对齐，以免漏胶。) (2)按前面方法配10%分离胶，加入TEMED后立即摇匀即可灌胶。灌胶时，可用10 ml枪吸取5 ml胶沿玻璃放出，待胶面升到绿带中间线高度时即可。然后胶上加一层水，液封后的胶凝的更快。(灌胶时开始可快一些...
参照抗体说明书的WB稀释比例，用抗体稀释液稀释好一抗，将膜从封闭液中夹出用滤纸吸去多余液体，放入抗体孵育盒中，倒入稀释好的一抗，过夜孵育。2.8二抗孵育 根据一抗来源选择合适的二抗，参照抗体说明书的WB稀释比例，用抗体稀释液稀释好二抗。将一抗孵育的PVDF膜用TBST洗涤3次，每次5min，将膜从洗涤液中夹出...
如果不方便观看视频,可以先收藏订阅「WB 实验专题」哦,更多实验干货集锦,定期更新! 此外,丁香实验还给大家梳理了实验所需材料和步骤的文字详解版本,感兴趣的同学,接着往下看吧~ 二、实验步骤详解 (一) 配胶 1. 洗玻璃板:用洗洁精洗净,再用蒸馏水冲洗后,...
实验步骤 1.准备样品，进行SDS-PAGE 聚丙烯酰胺凝胶电泳，电泳后不要染色，直接进行转膜。2.转膜：转一张膜需准备 6 张 7.0～8.3 cm 的滤纸和 1 张 7.3～8.6 cm 的硝酸纤维素膜。将切好的硝酸纤维素膜置于转膜液中浸 20 min才可使用。在加有转移液的搪瓷盘里放入转膜用的夹子、两块海绵垫、一支...
一、前期准备在进行WB实验之前，需要做好充分的准备工作。这包括确定实验目的、选择适当的抗体、配置所需的试剂和确定实验方案等。这些步骤需要仔细规划和准备，以确保后续实验的顺利进行。二、样品制备样品制备是WB实验的重要环节之一。在制备样品时，需要确保样品的代表性、稳定性和可重复性。同时，还需要根据实验需求...
1. 操作过程中要注意无菌操作,避免污染。 2. ECL化学发光液A和B的混合液要在使用前立即制备,不能提前制备。 3. ECL显影后,膜上的信号会逐渐消失,因此要及时采集图像。 4. 膜的保存要注意防潮、防霉、防冻。 总之,WB显影是Western Blot实验的重要步骤,掌握其原理和操作步骤对于实验结果的...
使用WB加速神器--SNAP i.d. 2.0,30分钟可以完成实验。 Snap i.d. 原理 Snap i.d. 与传统方法下的实验结果对比 Western Blot 基本步骤回顾 二、Western Blot常见问题及解决方案 正常条带示例 问题1:无特异性条带 一抗二抗是否使用正确? 种属:一抗是否适用于样本种属;二抗是否匹配一抗? 孵育时间和用量不足...