参照抗体说明书的WB稀释比例，用抗体稀释液稀释好一抗，将膜从封闭液中夹出用滤纸吸去多余液体，放入抗体孵育盒中，倒入稀释好的一抗，过夜孵育。2.8二抗孵育 根据一抗来源选择合适的二抗，参照抗体说明书的WB稀释比例，用抗体稀释液稀释好二抗。将一抗孵育的PVDF膜用TBST洗涤3次，每次5min，将膜从洗涤液中夹出...
WB加速神器--SNAP i.d. 2.0 使用WB加速神器--SNAP i.d. 2.0,30分钟可以完成实验。 Snap i.d. 原理 Snap i.d. 与传统方法下的实验结果对比 Western Blot 基本步骤回顾 二、Western Blot常见问题及解决方案 正常条带示例 问题1:无特异性条带 一抗二抗是否使用正确? 种属:一抗是否适用于样本种属;二抗是否...
一、实操详解视频 如果不方便观看视频,可以先收藏订阅「WB 实验专题」哦,更多实验干货集锦,定期更新! 此外,丁香实验还给大家梳理了实验所需材料和步骤的文字详解版本,感兴趣的同学,接着往下看吧~ 二、实验步骤详解 (一) 配胶 1. 洗玻璃板:用洗洁精洗净,再...
图3、4 上样,80v电压 图5 蛋白maker分离3、将胶置于电泳槽中,倒入电泳缓冲液,内部要漫过矮板,外部要漫过玻璃板底部;4、准备样品 maker 于冰盒上,顺序排好,上样,并在实验本上记录好;5、盖上电源盖,正负极相互对应,接通电源,恒压浓缩胶80V,30min或maker分离后可更改电压为120v,跑分离胶。待 loading buff...
0# WB 实验方法 蛋白提取在提取蛋白时，首先需要吸弃细胞培养液，并用PBS溶液对细胞进行漂洗。然后，向每孔中加入适量的RIPA裂解液，并加入PMSF和蛋白酶/磷酸酶抑制剂。注意，不同种类的细胞所需的裂解液量会有所不同，最终上样量应控制在10-20 μL左右。在冰浴条件下裂解10分钟后，用刮匙将蛋白收集到相应...
3、仪器、耗材：电泳仪、电泳槽、离心机、离心管、硝酸纤维素膜、匀浆器、剪刀、移液枪、刮棒 三、WB实验步骤 (一)试剂准备 1. SDS-PAGE试剂：见聚丙烯酰胺凝胶电泳实验。 2. 匀浆缓冲液：1.0 M Tris-HCl(pH 6.8) 1.0 ml;10%SDS 6.0 ml;β-巯基乙醇 0.2 ml;ddH2O 2.8 ml。
wb实验的流程wb实验的流程 Western blot(WB)实验,也就是蛋白质免疫印迹实验,基本流程如下: 样品制备。 收集细胞或组织:培养细胞的话,用胰酶消化等方法把细胞从培养皿上弄下来;要是组织,就把它切成小块。然后通过离心等操作收集起来。 裂解细胞或组织:加入含有蛋白酶抑制剂的细胞裂解液,把细胞或组织中的蛋白质释放...
有需要的同学请继续往下看,详细了解WB实验的每一个步骤!👇1️⃣ 细胞或组织样品制备:收集细胞或组织,进行蛋白质提取。 2️⃣ SDS-PAGE电泳:将蛋白质样品在凝胶中进行电泳分离。 3️⃣ 转膜:将电泳后的蛋白质从凝胶转移到NC膜或PVDF膜上。
(1) 准备玻璃板,确保两块玻璃板下缘水平且均无豁口,安装时内长外短,用手压实玻璃板及垂直槽制胶架。 (2) 倾斜垂直槽制胶架子装入垂直槽制胶固定架,注意为防止胶片变形漏液体,不要过分用力下压,并确保卡好。(3) 按照每块 5 mL 配制分离胶 (1 mm 厚度),轻轻混匀后立即铺板;(SDS-PAGE 凝胶配方详见“...