1 . 将膜用TBS从下向上浸湿后，移至含有封闭液的平皿中，室温下脱色摇床上摇动封闭1h。 2. 将一抗用TBST稀释至适当浓度(在1.5 ml离心管中);撕下适当大小的一块儿保鲜膜铺于实验台面上，四角用水浸湿以使保鲜膜保持平整;将抗体溶液加到保鲜膜上;从封闭液中取出膜，用滤纸吸去残留液后，将膜蛋白面朝...
1、实验原理 WB是一种把电泳分离的组分从凝胶转移到一种固相支持物（NC膜或PVDF膜），并以针对特定氨基酸序列的特异性试剂作为探针检测。WB采用抗体作为探针，抗体可以与附着在固相支持物的靶蛋白的抗原表位发生抗原-抗体免疫反应。这种技术的作用是对细胞或组织提取的蛋白混合物（即总蛋白混合物）中的某一特异蛋白进...
1) 显色步骤：配制DAB显色液，将膜放置于DAB显色液中，待条带显色清晰后，取出膜，自来水冲洗终止显色即可。2) 分享一个经过验证、好用的DAB配方（也可在试剂公司购买现成的DAB显色液）Western DAB显色液配方：1M Tris-HCl(PH8.0) 200μL5mg DAB水9.8mL用前加H2O2（30%）3.5μL #广州华韵生物科技...
其原理是∶先从生物细胞中提取总蛋白或目的蛋白，将蛋白质样品溶解于含有去污剂和还原剂的溶液中，经SDS-PAGE电泳将蛋白质按分子质量大小分离，再把分离的各蛋白质条带印迹到固相膜（硝酸纤维素膜或尼龙膜）上，并将膜与高浓度的蛋白质溶液温育，以封闭其非特异性位点，然后加入特异抗性体（一抗），膜上的目的蛋...
一、原理 蛋白质免疫印迹法即Western Blot。 它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法,基本原理是经过 PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分离的蛋白质样品,转移到固相载体例如硝酸纤维素薄膜(NC膜)或PVDF膜上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。
操作步骤: 1.准备样品 1)制冰,准备冰盒。 2)配制细胞裂解液:根据细胞数量确定所需裂解液:50ul/六孔板一孔 。 裂解液配方:100ul碧云天裂解液+1ul蛋白酶抑制剂混合物+1ul PMSF 3)按实验需要准备好细胞:去掉培养基,1×PBS洗3次(去掉培养基中的血清),每个孔(6孔板)加入适量的裂解液。迅速用细胞刮刮下细胞并...
一、基本原理 WB实验主要基于蛋白质的电泳分离和免疫染色原理。具体步骤如下: 1.样品制备:首先,需要从细胞或组织中提取蛋白质,并经过适当的处理,如裂解细胞、破碎细胞膜等,以获取纯净的蛋白质样品。 2. SDS-电泳:将样品加入聚丙烯酰胺凝胶(Polyacrylamide Gel),随后进行电泳。这一步骤会根据蛋白质的分子大小进行分离...
一、实验原理 WB实验基于蛋白质的电泳分离和免疫学检测。首先将蛋白质样本通过SDS-PAGE电泳分离,然后将分离后的蛋白质转移到聚丙烯酰胺凝胶膜上。接着使用一种特异性抗体与目标蛋白结合,最后通过酶标记的二抗和显色底物来检测目标蛋白。 二、实验步骤 1.样品制备:将待检测的蛋白样本加入SDS-PAGE凝胶中进行电泳分离。
免疫印迹 (Immunoblotting) 又称蛋白质印迹 (Western blot,WB),是一种综合性的免疫学检测技术。它利用 SDS-PAGE 技术将生物样品中的蛋白质分子按分子量的大小在凝胶上分离开,然后用电转移的方法将蛋白转移到固相膜上,以固相膜上的蛋白质作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶标记的第二抗体起反应,经过底物显...
进行WesternBlot实验时，只需购买现成的试剂盒，操作流程相对简单。其原理如下：首先，使用HRP标记的二抗进行检测，然后将反应底物加入到体系中，反应底物包含过氧化物和鲁米诺。当遇到HRP时，会发生发光反应，使得胶片曝光。通过洗片后，即可观察到蛋白质的条带。化学发光ECL底物的发光机制主要依赖于HRP酶...