🧪 一、实验前必知：外泌体 WB 的「三大定律」1. 标志物选择法则 2. 样本量黄金公式 最低上样量：50μg / 孔（新手建议 60-80μg，弥补转膜损失）外泌体浓度：≥1×10^10 particles/mL（NTA 检测值）血清处理：必须使用 Exosome-depleted FBS（Gibco 12661，残留＜5ng/mL）3. 仪器参数「红线」超速离...
今天,丁香实验就来和大家一起学习,采用 WB 实验鉴定外泌体的关键步骤。 一、外泌体是什么? 外泌体是直径约为 30-200nm,密度在 1.13-1.21g/mL 的小囊泡,其天然存在于体液中,包括血液、唾液、尿液和母乳等。 Western Blot 鉴定外泌体蛋白可以检测...
1.外泌体蛋白预处理方法有什么不同? 常规全细胞裂解液进行WB实验前,需要对样本进行超声处理,其目的一是为了增强蛋白裂解效率,二是为了打断染色质使样本澄清更方便后续实验。而外泌体WB实验则不同,由于外泌体表征蛋白主要为膜蛋白,更容易裂解提取,因此只需要直接裂解,同时添加常规蛋白酶抑制剂即可。若实验对象为特殊...
外泌体CD63 & TSG101蛋白检测试剂盒是针对外泌体标志蛋白 CD63 和TSG101 检测而研发的一款方便高效的试剂盒产品。产品中的外泌体蛋白专用裂解液可以高效地裂解外泌体并获得外泌体蛋白。 组分信息 组分编号 组分名称 规格 41203-A 外泌体蛋白专用裂解液 20 mL 41203-B CD63 & TSG101阳性对照品 50 μL(2...
图7 MSC的外泌体标志物 以上就是用WB鉴定外泌体中最常检测的指标了,大家可要注意下面这些点呀。 01 选择合适的阴阳标志物作为对照 例如:检测Tsg101、CD9、CD63、CD81其中2-3个;Calnexin、GM130其中1个,确定外泌体的浓度和纯度。 02 与全细胞裂解物做对比 ...
ZCIBIO——WB(外泌体)外泌体是一种微小的细胞器，它们存在于所有生物体中，包括人类。外泌体由脂质双层包裹，内含各种细胞激素、生物活性物质和细胞信息素等生物分子。它们具有很多重要的生物学功能，如调节免疫反应、运输蛋白质、参与细胞间通信等。外泌体可以通过多种方式释放，包括通过胞吐、胞吞和溶酶体消化等。
外泌体的形状是杯状或茶托形，可以通过电镜观察形态进行初步确定，外泌体的粒径大小在30-120nm左右，通过NTA可以检测到粒径大小，外泌体本身具有一些特殊的标志蛋白，通过WB可以检测出来。目前鉴定外泌体主要包括三方面实验，但是三方面实验在鉴定外泌体的存在、数量和完整性上分别存在一些缺陷。电镜 可以直观的看到...
WB外泌体表征鉴定 国际细胞外囊泡学会(ISEV)在2014年的提议,外泌体鉴定3个标志:透射电镜(transmission electron microscope,TEM)、粒径(Nanoparticle Tracking Analysis, NTA)、蛋白标志物(Western Blot, WB)。其中外泌体蛋白标志物主要检测指标为CD63、CD9、CD81、Tsg101、Alix、HSP70等,针对外泌体的定性检测,至...
目前统计的小鼠细胞系来源外泌体WB鉴定表征使用的阳性marker蛋白排名如下: 外泌体阳性蛋白Top5为跨膜蛋白CD63、CD9、CD81,以及溶质蛋白TSG101、Alix。 3.外泌体阴性蛋白统计分析 外泌体阴性蛋白指的是不存在于外泌体中或者外泌体中含量极低的蛋白,通常指各类细胞器富集蛋白(如内质网、高尔基体、线粒体、细胞核...
外泌体粒径NTA检测 WB:蛋白世界的 “探测器” WB 则像是蛋白世界的 “探测器”,能够鉴定外泌体中存在的特定蛋白。当 WB 检测到外泌体标志蛋白时,说明外泌体成分可能存在。然而,目前的这些标志物蛋白并非外泌体所特有,CD63、ALIX 等在细胞中以及一些细胞碎片、溶酶体、胞内体中也大量存在。这就好比在一堆物...