以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。 二、WB实验准备 1、材料:蛋白质样品(对应的一抗体二抗)2、试剂:丙烯酰胺、SDS、 Tris...
就是因为它可以分解二硫键,从而使蛋白质完完全全地线性化。原理是巯基乙醇【强还原性】可以使二硫键还原成2R-SH,和一个稳定的结构,使化学平衡向右移动。 SDS与蛋白质结合的相当均匀,与SDS贡献的负电荷相比,蛋白质本身的电荷可以忽略不计。 这样,蛋白质就可以根据其分子量的大小从而带有不同的负电荷,如图: 以上...
WB是一种把电泳分离的组分从凝胶转移到一种固相支持物(NC膜或PVDF膜),并以针对特定氨基酸序列的特异性试剂作为探针检测。WB采用抗体作为探针,抗体可以与附着在固相支持物的靶蛋白的抗原表位发生抗原-抗体免疫反应。这种技术的作用是对细胞或组织提取...
原理:不同分子量的蛋白质经过SDS-PAGE 凝胶电泳分离开后,转移到固相膜(如PVDF 膜和NC 膜)上,以固相膜上的靶标蛋白作为抗原,首先加入与靶标蛋白可发生特异性结合的一抗,再加入与一抗特异性反应的二抗,最后根据二抗的标记选择合适的方法检测靶标蛋白,以实现靶标蛋白的定性和半定量分析。 显影方法的选择是要根据...
1、实验原理 WB是一种把电泳分离的组分从凝胶转移到一种固相支持物(NC膜或PVDF膜),并以针对特定氨基酸序列的特异性试剂作为探针检测。WB采用抗体作为探针,抗体可以与附着在固相支持物的靶蛋白的抗原表位发生抗原-抗体免疫反应。这种技术的作用是对细胞或组织提取的蛋白混合物(即总蛋白混合物)中的某一特异蛋白...
对于要通过WB分析的蛋白质,首先必须要处理含有目标蛋白的样品,以使目标蛋白质可用于分析。例如,在筛选表达时,通过裂解细胞来释放蛋白质,使其进入分离基质。蛋白质提取之后可以进行变性和还原,目的是将蛋白质分解成一级结构,因此蛋白质在电泳期间可以根据不同的分子量分离。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺变性凝胶...
一、WB实验的原理 WB实验是通过将复杂的混合物中的蛋白质分离、电泳、转移和检测,来研究特定蛋白质的存在与表达水平。其原理主要包括以下几个步骤: 1.蛋白质提取与电泳分离:首先,需要从细胞或组织中提取目标蛋白质。常用的方法包括细胞裂解、超声破碎等。然后,将提取得到的蛋白质样品进行电泳分离,通常使用聚丙烯酰胺凝...
WB,是Western blotting的缩写,即蛋白质印迹法,又称免疫印迹(immunoblotting),也就通过电泳技术分离不同组分,再采用印迹技术将蛋白质转移(“印”)到特定的膜上,再利用抗原-抗体的特异性结合原理,用抗体作为探针去实现检测复杂样品中的靶标蛋白的方法,这项技术也可以用来检测不同时期蛋白表达的水平以及蛋白...
为此,本期内容从头到尾剖析WB原理,希望为大家答疑一二。 01 蛋白提取 常规的样品无外乎3种,分别是培养的细胞、动物组织(磨碎或剪碎至肉眼观察无颗粒)、术中切割的肿瘤细胞。这些样品需要在裂解液或强去污剂中充分裂解,细胞中的物质(总蛋白、基因、其它内容物等)才能释放出来,随后离心取上清液(即总蛋白混合物)。