这个问题更是困扰过不少同学,原因有两个,一是玻璃板与胶局部分离产生了缝隙,要注意取玻璃板(带有胶)时小心,不能有分离玻璃板与胶的动作;保存胶时注意不要将两块玻璃板直接接触,否则在取出来时由于两玻璃板之间充满液体,在大气压下吸得很紧,分开时容易将胶与玻璃板分离;拔梳子时也要小心,动作要轻;上样时也...
点样梳的选择:点样梳需与玻璃板匹配,如制作1.5mm厚度的凝胶应使用1.5mm的点样梳,否则拔掉梳子后,可能会发现每个胶孔都被胶堵了。 条带或电泳问题的处理:如发现WB的条带或电泳时的溴酚蓝很粗,可以适当增加浓缩胶的长度。通过以上步骤和注意事项,你可以成功制备出用于WB实验的聚丙烯酰胺凝胶,为后续的实验打下坚...
🧪WB实验:制胶全流程详解 1️⃣ 准备好制胶试剂盒(本实验使用的是雅酶一步法快速凝胶制备试剂盒)、大小玻璃板、制胶底座和制胶架。2️⃣ 将玻璃板按照前小后大的顺序塞入制胶架中,确保底部平整,然后将制胶架垂直下压,使玻璃板与密封垫之间没有空隙。3️⃣ 按照图示比例,将下层胶溶液和下层胶缓...
6、制好的凝胶如果不马上进行电泳,可以从制胶架上拆下来,保留梳子,然后用保鲜膜包裹好放入4℃冰箱,保存时间不应超过1周,最好是能现配现用。 7、如某段时间需要经常跑WB,分离胶及浓缩胶均可按照比例配好(除APS及TEMED外),过滤后作为储存液避光存放于4℃,可存放1个月,使用时,先放室温平衡,再加入相应的10%...
那么进入正文,我们对跑蛋白的介绍将从“制胶”、“跑胶”、“WB基本原理”、“WB常见的失误分析”等方面逐步介绍。 一、实验背景知识 Western Blot,即蛋白质免疫印迹实验,常用于检测单克隆或多克隆抗体识别的特异抗原。其为分子生物学、生物化学和免疫遗传...
接下来，我们详细了解一下WB技术中的制胶环节。凝胶的制备是通过聚丙烯酰胺与N,N′-亚甲基双丙烯酰胺（Bis）的交联反应完成的。当体系中加入过硫酸铵和TEMED时，凝胶开始逐渐凝固。而凝胶的结构可以通过调整丙烯酰胺的百分比来进行精细调控。具体来说，增加丙烯酰胺的总量会使凝胶孔径变得更加细密，从而减缓小分子蛋白在...
制胶流程 🛠️ 组装制胶装置:把玻璃板卡在制胶架上,底部贴紧海绵胶条。 配制分离胶:按照上面的配方配制所需浓度的分离胶(TEMED最后加),充分混匀后用移液枪小心地灌入玻璃板中。 液封分离胶:在分离胶表面轻缓地覆盖一层ddH2O,让表面平整,室温静置凝固约30-60分钟。 配制浓缩胶:使用同样的配方配制浓缩胶...
配好胶后,可以放在烘干箱里,但前提是不要多加促凝剂,充分混合,充分凝固。个人经验是,天气冷的时候多加点促凝剂,天气热的时候少加点。希望这些小技巧能帮到你们,少踩一些坑。如果有问题或者建议,记得留言哦!这只是个人经验,欢迎批评指正。来吧,我们逐一分析和解决!预告一下,下一篇我会聊聊WB制胶盒子的比较和一...
Absin BIS-Tris Gels预制胶优势：▲ BIS-Tris Gels是一款高性能的小型聚丙烯酰胺凝胶，相比于传统的Tris-Gly凝胶，Bis-Tris凝胶偏酸性，不容易降解，在4-25℃的条件下能够长时间储存 ▲ 不含SDS，根据使用的电泳缓冲液类型可进行变性或非变性电泳实验 ▲ 含有1.5厘米高的4%浓缩胶，可以有效确保获得非常锐利的条...
为什么会出现这种结果?最大的可能是WB 胶不均匀。你在 WB 制胶过程中是否也遇到这样或那样的问题呢,这里为你送上一份制胶 Tips! ▲上下滑动查看▼ 1. 使用洁净干燥的玻璃板 制胶用的玻璃板加洗洁精,用流水清洗干净,一定确保玻璃板上没...