为了确保Western Blot实验的准确性,该研究使用了两种内参:GAPDH及Stain-Free总蛋白。传统上,GAPDH作为内参是Western Blot的常规操作,但在某些样品或实验处理条件下,其表达可能出现不稳定的情况。因此,总蛋白内参成为一种更优选择。本研究中,作者使用了Stain-Free免染技术获得的内参作为GAPDH的替代,从而确
管家基因表达的蛋白质就是我们WB实验中所说的内参。 二、为何需要内参? 在Western blot实验中,我们通常需要检测不同处理条件下的蛋白质含量变化,但由于实验条件等因素的影响,不同样品中蛋白质总量可能会存在差异,因此需要使用内参进行标准化。使用内参可以消除实验条件等因素的影响,从而准确地比较不同样品中待检测蛋白...
在western blot(WB)实验中内参蛋白是非常重要且必须的一部分,内参蛋白通常是由细胞中管家基因编码的蛋白,内参保证了每个泳道中蛋白上样量相同,不同泳道上的蛋白以相同的效率从凝胶转到膜上,不同泳道上抗体孵育(包括一抗和二抗)、信号...
选择内参的第一步是确保所选择的内参蛋白适合您的实验。 重点考虑靶标蛋白的亚细胞表达位置,以及是否存在在同一亚细胞位置表达的内参蛋白。例如,如果您已经制备了仅由核蛋白组成的裂解物,用 DNA 结合蛋白作为内参要比细胞骨架蛋白更准确。 使用TBP (D5C9H) XP®Rabbit mA...
选择内参的原则? 1.样本种属来源哺乳动物还是植物,还是其他 2.目的分子量大小,需要与目的蛋白差5kd以上 3.蛋白表达位置,不同的细胞器内参相对应 4.内参蛋白与目的蛋白之间不能有调节作用 4 内参选择指南 为了让大家减少翻阅文献的时间,小编特意为大家整理出了动植物样品各组分的WB内参,请笑纳!(点击图片可另存为...
内参的选择 在western blot(WB)实验中内参蛋白是非常重要且必须的一部分,内参蛋白通常是由细胞中管家基因编码的蛋白,内参保证了每个泳道中蛋白上样量相同,不同泳道上的蛋白以相同的效率从凝胶转到膜上,不同泳道上抗体孵育(包括一抗和二抗)、信号检测都是一致的,是量化目的蛋白相对表达量的重要标尺。
一、什么是内参 内参即是内部参照(InternalControl),对于哺乳动物细胞来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白(Housekeeping Proteins),它们在各组织和细胞中的表达相对恒定,在检测蛋白的表达水平变化时常用它们来做参照物。内参的作用在于校正样本上样量,降低误差,确保实验结果的准确性。
上述研究揭示,GAPDH、β-actin 和β-tubulin 蛋白不适合作为衰老相关疾病 WB 研究中的内参蛋白。为了避免经典内参蛋白不准确的问题,研究人员已经在相关研究中引入了新的内参—Stain-free 总蛋白内参! 2024 年 1 月,发表在 Nature Aging(IF 17.0)上的一项研究发现,抑制 S6 激酶 (S6K)可降低与年龄相关的炎症,并通...
◆β-actin是广泛分布于细胞浆内的一种骨架蛋白,表达量非常丰富,广泛用于各种细胞类型的WB实验。但不适合作为心脏和骨骼肌样品的内参,心肌和骨骼肌样本可以用α-Actin做内参。另外脂肪组织中的actin表达量较少,也不适用于这类样本。 ◆ GAPDH(甘油醛-3-磷酸脱氢酶)是参与糖酵解的一种关键酶,几乎在所有组织中都...