在WB实验中,常用的内参包括β-actin、GAPDH、Tubulin等。这些内参不仅具有稳定的表达水平,而且在不同组织类型和实验条件下均能得到较为一致的结果。 胞浆内参的选择 🌍 GAPDH(糖酵解磷酸化酶):作为胞浆中参与糖酵解途径的关键蛋白,GAPDH被广泛用作胞浆内参。其表达水平相对稳定且广泛存在于各种细胞类型中。β-ac...
内参蛋白的表达量应该适中,既不过高也不过低,以便于检测和量化。如,骨骼肌中的β-actin表达量较低,因此这类样本不应选择β-actin作内参。在脂肪组织里,β-actin的表达量非常低,不适合作为内参。 分子量 🔢 内参的分子量应该与目标蛋白的分子量有明显差异,以便在电泳分离时能够分开。比如目标蛋白分子量为45kDa,...
例如,哺乳动物的组织或细胞样本常选择β-actin、β-tubulin、GAPDH等,而植物样本可能选择plant actin、Rubisco等作为内参。 细胞定位:根据目标蛋白的亚细胞定位选择相应的内参。例如,如果是检测全细胞或细胞质蛋白,可以选择β-actin、β-tubulin、GAPDH等;如果是核蛋白,则可能选择Lamin B、Histone H3等作为内参。 实验环...
内参蛋白在整个WB实验中可以说意义重大,作用非凡。首先,在WB结果中可以直观的判断目的蛋白的表达情况;若内参条带亮度一致,即可排除实验中上样量的影响;其次,由于内参蛋白容易显现,且存在范围广,能够帮助我们查找WB实验中的问题所在,如电泳,转膜条件是否合适,显...
在Western Blot中使用内参其实就是在WB过程中另外用内参对应的抗体检测内参,这样在检测目的产物的同时可以检测内参的表达,由于内参在各组织和细胞中的表达相对恒定,借助检测每个样品内参的量就可以用于校正上样误差,这样半定量的结果才更为可信。此外使用内参可以作为空白对照,检测蛋白转膜情况是否完全、整个Western Blot显...
在进行WB(Western Blot)实验时,选择合适的内参抗体至关重要。内参抗体在实验中扮演着“参照物”的角色,帮助我们准确量化目的蛋白的表达水平。以下是选择内参抗体时需要考虑的几个关键因素: 样本种属来源 🐿️ 根据样本的种属来源选择内参抗体。例如,哺乳动物样本常用的内参包括β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B...
此外,内参还能作为空白对照,检测蛋白转膜是否完全,以及整个WB显色发光体系是否正常。内参抗体有很多种,比如β-Actin、β-Tubulin、GAPDH等。下面我们来简单聊聊如何选择内参。 目的蛋白分子量 📏 选择内参抗体时,首先要考虑目的蛋白的分子量。通常来说,目的蛋白与内参蛋白的分子量最好相差5KDa以上。比如,如果你在检测...
1. 内参的作用? Western Blot即免疫印迹试验,可以用于比较在不同条件下,不同细胞组织中目的蛋白表达量的差异,内参一般选用管家基因表达的蛋白,它们在各个组织细胞中表达相对恒定,不会因为外部条件变化而引起表达量的变化;而且内参可以监测整个试验体系是否正常,比如蛋白提取过程,转膜体系,显色体系等。 2. 三大内参 bet...
WB内参选择指南 1、什么是内参? 内参是Western Blot实验中用于标准化和校正实验误差的一类蛋白质。它们通常是在不同组织和细胞中表达相对恒定的蛋白质,由管家基因编码,常用作检测目的蛋白表达水平变化时的参照物。 2、内参在WB中的作用是什么? 校正实验误差:内参用于校正蛋白质定量和上样过程中的实验误差,以保证实验...
1、什么是内参? 内参是Western Blot实验中用于标准化和校正实验误差的一类蛋白质。它们通常是在不同组织和细胞中表达相对恒定的蛋白质,由管家基因编码,常用作检测目的蛋白表达水平变化时的参照物。 2、内参在WB中的作用是什么? 校正实验误差:内参用于校正蛋白质定量和上样过程中的实验误差,以保证实验结果的准确性。