摘要院为研究烟草脆裂病毒(Tobaccorattlevirus,TRV)介导的基因沉默(Virus-inducedgenesilencing,VIGS)技术 应用的广谱性袁以陆地棉()1为标记基因袁通过构建基因沉默载体袁在新陆早33和亚 洲棉()建立了TRV-VIGS体系遥半定量PCR分析表明袁与对照相比袁TRV侵染的新陆早33 和亚洲棉中1基因的表达均被有效抑制袁真叶表现出...
2.根据权利要求1所述的一种基于trv-vigs技术快速鉴定杜鹃花基因功能的方法,其特征在于,步骤(1)包括如下步骤:提取杜鹃花总rna,反转录得到cdna,根据目的基因编码区设计特异引物,将扩增产物连接至t载体,转入大肠杆菌,对阳性克隆进行测序。 3.根据权利要求2所述的一种基于trv-vigs技术快速鉴定杜鹃花基因功能的方法,其特...
WT,未注射烟草对照植株;TRV,注射TRV空载体对照植株;TRV-ZDS,注射指示基因片段ZDS菌液植株。 具体实施方式 1. ZDS 基因的同源克隆及ZDS-TRVVIGS载体构建 通过NCBI搜索 ZDS 基因序列,在ATG和TGA处设计保守引物。以普通烟草红花大金元cDNA为模板进行PCR扩增,回收目的片段,T-A连接,转化大肠杆菌(DH5α)感受态,37°C...
(virus-induced gene silencing,VIGS)技术已广泛用于植物基因功能研究,以烟草脆裂病毒 (tobacco rattle virus, TRV)为载体的沉默体系介导大豆基因沉默效率有待明确,采用无缝克隆技术构建 TRV-VIGS 沉默体系,探 索不同接种方法对大豆靶基因在不同组织间的沉默效率,为大豆基因功能研究提供依据.以八氢番茄红素去饱和酶(...
【目的】建立欧洲甜樱桃果实VIGS体系.【方法】利用In-Fusion cloning技术,构建欧洲甜樱桃的烟草脆裂病毒(TRV)介导基因沉默表达载体pTRV2-ANS,转入农杆菌GV3101中,采用注射压迫法侵染欧洲甜樱桃果实,通过分子检测,qRT-PCR和表型观察技术评价TRV介导VIGS沉默体系的效果.【结果】TRV::ANS侵染的欧洲甜樱桃果实ans基因的表达...
1.一种基于trv-vigs技术快速鉴定薄壳山核桃基因功能的方法,其特征在于,包括如下步骤: 2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)包括如下步骤:提取薄壳山核桃总rna,反转录得到cdna,设计目标基因和指示基因cds序列扩增引物,将扩增产物连接至t载体中,转入大肠杆菌,获得连有目标基因和指示基因cds片段的重组质粒;ptr...
PBJ | 华中农大辣椒功能基因组研究团队建立一种基于TRV载体的高效沉默辣椒花和果实特异表达基因的VIGS体系 近日,华中农业大学园艺林学学院辣椒功能基因组研究团队在权威杂志Plant Biotechnology Journal在线发表了题为”Promoting virus induced gene silencing of pepper genes by a heterologous viral silencing suppressor.“...
本研究以八氢番茄红素脱氢酶(Phytoene desaturase,PDS)基因和查尔酮合酶(Chalcone synthase,CHS)基因为报告基因,以烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)为载体建立基于病毒介导的观赏花烟草(Nicotiana sanderae)基因沉默体系(Virus-induced gene silencing,VIGS)。结果表明,根吸收法不适用于观赏花烟草的基因沉默体...
4)vigs实验所用沉默载体trv1和trv2(参见图1)及重组载体trv-gfp,由清华大学刘玉乐教授馈赠(2011年10月),但均可根据现有文献自行构建。 5)lb液体培养基配方:10g/l胰蛋白胨、5g/l酵母提取物、10g/lnacl; lb固体(平板)培养基:制作平板,则在lb液体培养基中再加入15g/l琼脂粉即可。
欧洲甜樱桃TRVVIGS基因沉默果实【目的】建立欧洲甜樱桃果实VIGS体系.【方法】利用In-Fusion cloning技术,构建欧洲甜樱桃的烟草脆裂病毒(TRV)介导基因沉默表达载体pTRV2-ANS,转入农杆菌GV3101中,采用注射压迫法侵染欧洲甜樱桃果实,通过分子检测,qRT-PCR和表型观察技术评价TRV介导VIGS沉默体系的效果.【结果】TRV::ANS侵染...