之后,该课题组在前人研究的基础上设计了两种针对不同基因靶点且缺少这段序列的tRNA-sgRNA融合体(TG)并与原融合体(T9G)进行了sgRNA二级结构方面的比较,实际观察到了9核苷酸序列的存在会导致茎环结构扰动等之前模型预测的结果,缺少该段序列的tRNA-sgRNA融合体相比原融合体在基因敲入与基因敲除的效率上均有不同程度的提
此外,本研究还利用tRNA-sgRNA系统在体内和体外转录表达功能性sgRNA,经SaCas9和tRNA-sgRNA的组合编辑青鳉基因组中的tyr基因。实验结果表明,SaCas9/sgRNA和SaCas9/tRNA-sgRNA系统均能有效编辑青鳉基因组,而PAM序列是该系统进行有效编辑的关键部分。此外,tRNA还能使sgRNA受巨细胞病毒等常见启动子的控制,从而提高系统的适应...
子tRNA-sgRNA/Cas9（PTG/Cas9）系统来对多靶点进行基因编辑。该系统已经在水稻中验证其可促进sgRNAs 的转录和提高多靶点的编辑效率。因此，为了在多年生黑麦草中实现高效的基因编辑，本研究中，构建了2个带有 tRNA的CRISPR中间载体，并提供了一种快速、灵活的PTG/Cas9载体构建方法。为了快速验证PTG/Cas9系统 是否可以在...
Transfer RNA (tRNA) can link multiple sgRNAs (single-guide RNAs) to form a polycistronic gene, which then combines with a CRISPR/Cas9 (clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPRassociated gene 9) expression vector to form a polycistronic tRNA-sgRNA/Cas9 (PTG/Cas9) ...
tRNA-sgRNA fusionYarrowia lipolytica is an important oleaginous yeast currently used in the production of specialty chemicals and has a great potential for further applications in lipid biotechnology. Harnessing the full potential of Y. lipolytica is, however, limited by its inherent recalcitrance to ...
本发明属于基因工程和生物,具体涉及里氏木霉基因组的改造,进一步涉及利用trna多个串联sgrna表达里氏木霉crispr/cas9的建立方法及应用。 背景技术: 1、公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解,而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
因此,基于trna-sgrna序列很快就在水稻、玉米、小麦等单子叶植物中被应用于基因编辑。 早先报道的trna-sgrna表达系统进行目标靶序列的组装是通过goldengate法进行,实现含目标靶序列的多个trna-sgrna表达序列的串联需要设计多条引物,进行多轮pcr才能完成多个靶位点的组装。另外,将目标靶序列连同trna-sgrna序列直接进行化学...
本发明提供的tRNA‑sgRNA表达序列,使多个目标靶序列的组装可以逐步组装到tRNA‑sgRNA表达载体中,实现烟草、甘蓝等诸多植物多位点的基因编辑;通过将组装有不同目标靶序列的tRNA‑sgRNA表达序列单元重复插入Cas9基因表达载体,可实现多个基因的编辑或者根据目标进行不同基因的组合编辑。
Efficient genome editing by CRISPR/Cas9 with a tRNA-sgRNA fusion in the methylotrophic yeast Ogataea polymorpha. J Biosci Bioeng. 2017;124:487-92.Numamoto M, Maekawa H, Kaneko Y. Efficient genome edit- ing by CRISPR/Cas9 with a tRNA-sgRNA fusion in the methylotrophic yeast Ogataea ...
tRNA-sgRNA complexDihydroflavonol 4-reductaseGoldenBraid cloningINTRON-MEDIATED ENHANCEMENTFREQUENCY TARGETED MUTAGENESISSITE-DIRECTED MUTAGENESISGENE-EXPRESSIONKey message Combination of UBIQUITIN10 promoter-directed CAS9 and tRNA-gRNA complexes in gene-editing assay induces 80% mutant phenotype with a knockout ...