我培养了NK细胞,做了流式检测,发现CD4CD25CD127高,Treg也高,达到12.9%,这有什么问题吗? NK细胞是调节免疫力的细胞,如果高的话通常没有太大问题。Treg高可能意味着免疫抑制,但具体还需要看您是在做什么实验,以及这些细胞的变化情况。 我只是做一项实验,如果影响不大就好。 嗯,如果影响不大,通常没有太大问题。
(1)每管取1×106细胞,制备Blank管(细胞不进行抗体染色),CD4单染管(细胞只染色anti-mouse CD4抗体),CD25单染管(细胞只染色anti-mouse CD25抗体),CD127单染管(细胞只染色anti-mouse CD127抗体)。用于调节测试电压和荧光补偿。 (2)最多可取3x107细胞,制备全染管(添加了anti-mous...
FoxP3是Treg细胞发育成熟和发挥功能的必要因素，是目前Treg细胞最敏感的标记，但检测FoxP3需要对细胞进行破膜，如后续实验需要上样细胞且细胞保持完整，可以CD4+CD25+CD127低表达作为Treg标志，CD127位于Treg细胞表面。图片来源：网络 检测步骤 —— 以CD4+CD25+FoxP3+作为标志：1. 在流式管中加入100 μl抗凝血或...
1纯度问题:磁珠分选CD4+CD25+Treg细胞或流式分选CD4+CD25+CD127lo/-Treg细胞,两种分选方法都避开了Treg最特异性的标签—核内转录因子Foxp3。 2得率问题:小鼠脾脏中Treg细胞的占比不足10%,想要获取足够量的细胞,就要牺牲不少的小鼠和分选试剂。 3表型问题:从健康小鼠脾脏分选得...
4.按说明书推荐用量加入CD4、CD25、CD127流式抗体,全染管相比较单染管抗体用量适当提高至3-5倍,混匀后,4℃孵育30min。 5.各管加入1mL PBS(洗掉未结合的抗体),1500rpm离心5min。 6.弃上清,Blank及单染管用1mL PBS重悬即可,而全染管用2-3mL PBS重悬(防止细胞太多堵塞分选管道),流式上机分选CD4+CD25+CD...
复旦大学附属中山医院检验科基于流式细胞术平台开展了调节性T细胞(CD3 + CD4 + CD25 + CD127 low ) 的检测项目,该项目能够帮助临床评估患者的免疫状态,辅助临床诊疗。 图1:调节性T细胞—Treg 什么是调节性T细胞? 调节性T细胞 (Regulatory T cell, Treg) 能够抑制体内潜在的自身反应性T细胞的活化与增殖,是调节免...
目前主要是用CD4+ CD25+ CD127lo/hi作为CD4+ Treg细胞分离的主要表征。随着对CD4+ Treg表型和功能之间联系的认识逐渐深入,研究人员也在更新或者开发新的亚群分类系统。 (一) Sakaguchi等人2009年提出了一种基于CD45RA表达的CD4+ Treg细胞亚群分类方法。
Treg是T细胞的一个子集, 占CD4+T细胞总数的5-10%,具有维持体内平衡和预防自身免疫的功能,其特征是CD4、CD25、FOXP3和低水平CD127的共同表达。高水平的FOXP3和特异性去甲基化区域(TSDR)的去甲基化是Treg的显著特征,TSDR是FOXP3基因中的一个保守区域。
该应用方案中,利用Treg 扩增试剂盒,人,有效扩增 CD4+CD25+CD127dim/–Treg细胞分离试剂盒分离的Treg表达Foxp3。它包括一个Treg细胞完整的工作流程,描述从外周血单个核细胞(PBMCs)分离人Treg细胞,细胞体外扩增,以及随后的流式细胞分析。 01. PBMC分离
1纯度问题:磁珠分选CD4+CD25+Treg细胞或流式分选CD4+CD25+CD127lo/-Treg细胞,两种分选方法都避开了Treg最特异性的标签—核内转录因子Foxp3。 2得率问题:小鼠脾脏中Treg细胞的占比不足10%,想要获取足够量的细胞,就要牺牲不少的小鼠和分选试剂。 3表型问题:从健康小鼠脾脏分选得到的Treg细胞大部分是nTreg,如果我们...