实时PCR分析 使用RecoverAll总核酸分离技术（Life Technologies）从皮肤活检中提取总RNA，并通过实时PCR分析[27]。引物组如下：IFN-α2A，5 [0] TCTGCTATGACCATGACACGAT3 [0]/5 [0] CAGCATGGTCCTCTGTAAGGG3 [0]；IFN-β，5 [0] CAGCAATTTTCAGTGTCAGAAGC3 [0] / 5 [0] TCATCCTGTCCTTGAGGCAGT3 [0]...
ELISA测定:使用TNF-α专用的ELISA试剂盒,根据说明书进行操作,测定样本中TNF-α的浓度。 qPCR(定量PCR): RNA提取与逆转录:从细胞或组织中提取RNA,并逆转录为cDNA。 PCR反应:使用特异性引物进行qPCR,定量分析TNF-α的mRNA表达水平。 TNF-α的功能分析 目标:研究TNF-α在炎症反应和免疫调节中的作用。 步骤: 细胞迁...
1.5半定量RT—PCR在50l体系中含10× BcalstBuffer5l,4lMgSO(25retool/L),30l RNasefreeH2O,2.5lTaq(0.5U),1ldNTP (10mmol/L)TNF—a及f}.actin的上下游引物各 0.5l(0.3/~mol/L),5l(约100ng)RNA逆转录得到的eDNA.循环参数为94℃5min,然后94℃ 30S,58℃30S,72℃60S,共30个循环,最后72 ℃延伸5...
PCR检测TNF—amRNA表达,探讨肿瘤患者与正 常人外周血单个核细胞的TNF—amRNA表达的 变化,同时建立半定量RT—PCR,比较两者检测结 果. 1材料与方法 1.1外周血标本标本采自随机健康成人和医院 肿瘤患者外周血. 1.2半定量RT—PCR引物所用的TNF—a, actin引物由上海生工生物工程有限公司合成.根 据TNF—amRNA序列嘲,...
1 3 4实时定量PCR:所用引物同上。反应体系为25μL:SYBRGreen12 5μL,primer各1μL,cDNA1μL,剩余补水(DEPC-treated)9 5μL。 2结果 2 1不同作用时间、相同作用浓度的TNF-α对BMP-1表达的影响:本组资料研究表明,TNF-α作用时间分别为24、12、6、2h,作用浓度为5ng/ml。对于那些已经损伤的MCL细胞中,BM...
2.7 qRT-PCR检测Nrf2、NQO1和HO-1mRNA表达 取处于对数生长期的Caco-2细胞,按“2.5”项下方法分组并给药,收集细胞,用预冷的PBS洗涤。按照试剂盒说明书提取总RNA并合成cDNA,进行qRT-PCR分析[17]。引物由生工生物工程(上海)股份有限...
上游引物:5′-AGGCAATAGGTTTTGAGGGCCAT-3′,下游引物:5′-TCCTCCCTGCTGCTCCGATTCCG-3′。(3)PCR扩增:反应体系为dNTPs 0.5 μL,10×PCR缓冲液2.5 μL,双蒸水19.3 μL,基因组DNA 1.5 μL,上下游引物各0.7 μL,Taq DNA聚合...
PCR反应条件为:95 ℃×15 s,(95 ℃×5 s,60 ℃×30 s)×40个循环,95 ℃×15 s,60 ℃×15 s,95 ℃×15 s。引物序列如下:RPL13a正义链5’-CCTGGAGGAGAAGAGGAAAGAGA-3’,反义链5’-TTGAGGACCTCTGTGTATTTGTCAA-3’;Di...
①P2X7R mRNA:采用RT-PCR法。取各组细胞,吸弃培养基后,每孔加入1 mL的TRIzol充分裂解细胞,然后吸至离心管中。按照RNA提取试剂盒说明书提取各组细胞总RNA,测定RNA浓度后,按照逆转录试剂盒说明书逆转录合成cDNA,以cDNA为模板进行实时...
Mouse Tnf qPCR Primer Pair,即小鼠Tnf qPCR引物对,主要用于基于SYBR Green的qPCR、One-Step qRT-PCR或semi-quantitative PCR。本引物为预先设计、经过qPCR验证、预混的引物对。 qPCR (Quantitative PCR)即定量PCR,也称实时荧光定量PCR或实时定量PCR (Real-time quantitative PCR)、实时PCR (Real-time PCR),是一种...