我们利用CRISPR/Cas9技术在Tmem119基因的终止密码子前插入了2A-CreERT2基因盒,使得Cre重组酶具有Tmem119启动子特异性,且需要tamoxifen的存在才能激活。 通过将Tmem119- CreERT2与荧光报告基因小鼠基因交配发现,Tamoxifen诱导的Tmem119- CreERT2系可以在很长一段时间内对小胶质细胞产生稳定的遗传修饰。
Tmem119-CreERT2小鼠构建Tmem119-CreERT2小鼠构建 Cre蛋白是一种存在大肠杆菌噬菌体P1的重组酶,它可以特异性识别细胞内基因或DNA上的LoxP序列并根据LoxP序列的位置和LoxP序列之间的关系,介导不同的特异性重组反应。 条件性基因敲除的基本原理利用的重组方式是:当两个LoxP位点位于一条DNA链上且方向相同Cre重组酶能...
为了评估Tmem119-CreERT2小鼠诱导后在小胶质细胞中是否有Cre活性,我们将Tmem119-CreERT2小鼠与R26-LSL-tdTomato报告小鼠进行杂交。 实验表明:无Tamoxifen诱导的对照组中,检测不到tdTomato的表达,只有经Tamoxifen诱导后,小胶质细胞才能够表达tdTomato(Fig4. A-B)。 此外,在少突胶质细胞、神经元和星形胶质细胞中都检测...
我们利用CRISPR/Cas9技术在Tmem119基因的终止密码子前插入了2A-CreERT2基因盒,使得Cre重组酶具有Tmem119启动子特异性,且需要tamoxifen的存在才能激活。 通过将Tmem119- CreERT2与荧光报告基因小鼠基因交配发现,Tamoxifen诱导的Tmem119- CreERT2系可以在很长一段时间内对小胶质细胞产生稳定的遗传修饰。