将重悬的细胞加入新的T25瓶子,补充4ml全培1640,同时额外补充前面讲的那个变黄的上清2ml(THP1喜欢酸性环境,取它原来的生长环境上清液有助于感染病毒之后的细胞活性变好,前提是这个变黄的培基不能有污染,确保没有支原体和病原体污染),将这7ml液体混匀,竖着放置培养瓶。 2-3天之后镜下观察细胞,可见细胞活力很好,虽然数量不多,也
本研究通过在THP-1细胞中过表达WTAP,探讨了m6A蛋白在APS调节THP-1巨噬细胞炎症中的作用机制[1]。 为了研究黄芪多糖调节m6A修饰水平的机制,作者首先检测了黄芪多糖处理是否会影响脂多糖(Lps)诱导的THP-1巨噬细胞中m6A修饰系统相关蛋白的表达。如图1所示,APS处理24 h后,WTAP的mRNA表达明显降低,与其他相关蛋白相比,...
WTAP过表达不影响THP-1巨噬细胞中p65的总体表达水平。APS可阻止LPS诱导的THP-1巨噬细胞p65从细胞质向细胞核的易位。然而,在APS处理的THP-1巨噬细胞中,WTAP过表达促进了p65从细胞质向细胞核的易位。为了更好地研究p65的核和细胞质分布,从THP-1巨噬细胞中提取核和细胞质蛋白。结果显示,在转染WTAP过表达质粒的THP...
2.4 转染THP-1细胞系将获得的重组慢病毒转染THP-1细胞系，采用威尼德电穿孔仪进行电穿孔转染，以提高转染效率。转染后48小时，荧光显微镜观察并计算转染效率。通过嘌呤霉素筛选，建立FNDC5过表达的稳定转染细胞系。2.5 检测FNDC5表达情况将稳定转染的THP-1细胞系分为三组：空白组、空载组和FNDC5组。采用Western bl...
构THP-1过表达稳转细胞系,轻松锁定炎症/免疫作用机制 THP-1细胞系是一种人单核细胞白血病细胞系,来自一位急性单核细胞白血病患者的外周血液,于1980年被建系,属于悬浮细胞。相对于U937、HL-60、ML-2等白血病细胞系,THP-1更有类似人原代单核细胞的形态和功能特征(包括细胞分化标记);而相对于人外周血单核细胞(PBM...
作者假设WTAP通过NF-KB途径调控IL-6,并通过WB检测APS处理的THP-1巨噬细胞中p65的表达水平。结果显示,APS不影响p65的表达(图3)。WTAP过表达不影响THP-1巨噬细胞中p65的总体表达水平。APS可阻止LPS诱导的THP-1巨噬细胞p65从细胞质向细胞核的易位。然而,在APS处理的THP-1巨噬细胞中,WTAP过表达促进了p65从细胞质...
通过Ni-NTA纯化THP-1稳转细胞的PSMB9-eGFP-His融合蛋白,在全细胞蛋白上样液(IP)及洗脱液(Elu)样本中,基于Anti-PSMB9抗体检测目的融合蛋白,结果显示,在55 kDa处检测到显著的蛋白表达信号,证明成功纯化了外源过表达的PSMB9融合蛋白,...
SP110在THP1巨噬细胞中过表达模型建立及功能学研究.pdf,摘要 目的:构建SP110 基因过表达的人单核巨噬细胞THP-1细胞模型,体外感染结核分枝杆菌 H37Ra。初步探讨SP110基因在巨噬细胞抗Mtb 感染中的作用机制。 方法:①利用PCR法获取SP110基因序列,构建慢病毒载体LV5-SP110,
为了研究IL-38在THP-1单核细胞系体外过表达是否影响其细胞因子的产生,研究人员使用慢病毒转染THP-1细胞法使其过表达人IL-38(图3A, B)。结果显示在THP-1细胞中过表达IL-38显著降低了脂多糖(LPS)刺激后IL-6和IL-23p19 mRNA的表达。此外还显著降低LPS诱导的IL-6、TNFα、IL-23和IL-10蛋白分泌2.5倍(图3C,...
结果显示在THP-1细胞中过表达IL-38显著降低了脂多糖(LPS)刺激后IL-6和IL-23p19 mRNA的表达。此外还显著降低LPS诱导的IL-6、TNFα、IL-23和IL-10蛋白分泌2.5倍(图3C, D),但IL-1β未受影响(图3D)。 该研究强调了IL-38在体内过表达的抗炎作用:该细胞因子在炎症浸润中作用于巨噬细胞,对Th17细胞因子有...