1. 准备所需的培养基、离心管以及无菌枪头等；（培养基提前预热）2. 将所有细胞悬液转移至离心管中；3. 900-1000rpm，3min离心；4. 弃上清，加5mL PBS轻轻重悬细胞进行润洗，再900-1000rpm，3min离心；Tips：此处PBS润洗是为了去除细胞碎片，平时培养若细胞碎片不多可以忽略此步骤，若碎片偏多，可以重复...
(1)THP-1细胞冻存后复苏困难,因此要保证冻存的细胞数目足够5×10^5-10^6个cell/ml;否则细胞密度过低,复苏后状态不好。 (2)培养过程中如果存在细胞碎片,可等待细胞长起来后,通过低速离心去除。 (3)细胞发生少量聚团时我们可以等待THP-1细胞密度扩大后改善这种情况,但发生严重聚团时我们可以提高血清(FBS)用量,...
1. 补液法：培养基变黄时可补加适量（1~2mL）新鲜培养基，补加1-2次之后，用离心的方式全部换液，离心1200rpm （约250g）3分钟。2. 半换液法：以T25瓶子为例，瓶子里装有5mL培养基。竖起瓶子静置一段时间，待细胞沉底（以肉眼观察到沉底为限），小心吸出2.5mL的培养基，转移到离心管，离心1200rpm （约...
1. 细胞培养:THP-1细胞培养于含有10%FBS+1%P/S的RPMI-1640培养基中,培养环境为37℃,5%CO2。可以每隔3-4天加一些新鲜的培养基,或直接传代。 2. 细胞传代:当细胞密度达到约8x10^5cells/ml左右时,即可进行传代。由于是悬浮细胞,可直接将细胞吸出,离心之后传代。传代最少浓度不应少于1x10^5 cells/ml。 3....
加入IL-4(诱导浓度：20ng/mL)(abs04698)、IL-13(诱导浓度：20ng/mL)(abs04079)培养48h，诱导其向M2极化；最后，在无刺激物和无PMA的情况下，用无血清RPMI-1640基础培养基重悬细胞，可保持72h。诱导步骤 THP-1诱导分化成巨噬细胞实验步骤：（1）THP-1细胞的培养：更多培养技巧可查看THP-1细胞培养攻略 THP-...
1. THP-1细胞在偏酸性环境中生长更快，所以当培养基稍微变黄（呈橘红色）时，是适合细胞生长的，此时补液或半换液即可；2. THP-1细胞培养液中需添加β-巯基乙醇（细胞培养级别），若不添加，可能会对细胞状态造成影响；3. THP-1细胞比较难复苏，复苏初期细胞生长缓慢且会有部分细胞破碎，出现黑色细胞碎片，少量...
1. 预热水浴锅至37℃ 2. 准备一个15mL离心管,加入2-3mL左右完全培养基待用 3. 将细胞从-80℃冰箱或液氮中取出后,放进一次性PE手套中,立即投入水浴锅,迅速用力摇晃管子,使其1分钟内融化 4. 酒精擦拭冻存管,进入生物安全柜,把融化的细胞悬液缓慢滴加到步骤2准备好的离心管中 ...
图1 1640基础培养基(abs9484)和胎牛血清(特级)(abs972) 图2 THP-1(人单核细胞白血病细胞) THP-1单核细胞正常形态为悬浮的体积较小、透亮的圆形细胞,少数聚团成葡萄状,粒粒饱满,轮廓清晰(如图3)。该细胞在偏酸性环境中,生长更快,所以当培养基稍微变黄(呈橘红色)时,是比较适合细胞生长的,此时补液或半换液...
配好的THP-1培养基与DMSO按9:1比例配制冻存液。离心后用冻存液重悬,将冻存管放入梯度冻存盒后放入-80℃冰箱。一般补液法后离心的细胞冻存3管,复苏后状态很好。 ⚠️ 注意:商品化的无血清冻存液不太适用于THP-1细胞,之前有一批偷懒用了无血清冻存液后复苏起来全嘎了。‼...