单质粒tet-on系统的构建、细胞验证及转基因小鼠模型的建立
内容提示:ClassifiedIndex:Confidential(yes/no):noCode:10224N0.1005319DissertationfortheMasterDegreeTheConstructionandCellularVerificationofSingle—PlasmidTet—onSystem,andEstablishmentofTransgenicMiceModelCandidate:MaZhuoSupervisor:Prof.XuLiDegreeCategory:MasterofAgricultureCollege:AnimalScienceandTechnologyFirstlevel...
单质粒Tet-on系统的构建、细胞验证及转基因小鼠模型的建立 目 录 摘要 英文摘要 1 前 言1 1.1 本课题研究背景及理论依据1 1.2 四环素调控系统的概述3 1.2.1 四环素调控系统的作用机制3 1.2.2 四环素调控系统的特点5 1.2.3 四环素基因表达调控系统的研究新进展6 1.2.4 四环素调控系统细胞模型的研究进展7 1.2....
将构建好的PTRE-HIF-1α用脂质体法转入HepG2Tet-on细胞,在强力霉素的作用下,用RT-PCR及Western blot法鉴定重组质粒的表达。结果 扩增出HIF-1α的cDNA测序结果与Genbank记载完全一致,并成功克隆入PTRE2hyg,将反应质粒PTRE-HIF-1α转入HepG2Tet-on细胞,可以完整有效表达HIF-1α且受强力霉素的调控。结论 成功...
李高鹏。【摘要】 目的 克隆和构建携带人低氧诱导因子一1a(HlF-1a)的Tet-on基因表达系统反应质粒P僻“删4。方法以缺氧的肝癌细胞株HepG2总RNA为模板,进行RT-巢式PCR,获得HIF-la的cDNA,克隆入Tet-on基因表达系统反应质粒P”￡2h,酶切重组子鉴定。将构建好的PTR。mM。用脂质体法转人HepG2h”“细......
Tet-on基因表达系统反应质粒P TRE-HIF-1α的构建和表达鉴定
常规Tet-On质粒载体可以用质粒转染的方式导入多种多样的哺乳动物细胞。在生物医学领域,利用常规转染将质粒载体转到哺乳动物细胞中是使用最广泛的方法。虽然近年来开发了不少更为先进的基因导入载体系统(如慢病毒载体、腺病毒载体、AAV载体和piggyBac等),但常规质粒基因表达载体仍被大多数实验室使用,这主要得益于其在技术...
本实验利用Tet-on真核表达系统,尝试以Clontech公司的PTRE-Tight和PTRE-Tight-Luc载体为基础,将反式蛋白rtTA表达框和低背景响应元件Ptight组装到同一个载体上,成为"二合一"的pTRE-Tight-rtTA,用EGFP和Luciferase两种报告基因代替目的基因,构建单质粒(pTRE-Tight-rtTA-EGFP和pTRE-Tight-rtTA-Luc)模式的四环素诱导表达...
Tet-on circRNA Expression Vector质粒结构圻明生物公司现货供应 使用方法 Tet-on circRNA Expression Vector质粒结构收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒的抗性、感受态和培养温度。 1、质粒干粉(请务必转化挑单克隆重提后使用) ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μ...
[0025] 本发明中一种带有标记基因的Tet-on诱导过表达的重组载体的构建方法,包括如 下步骤:[0026] 步骤一:设计5 ' 引物GFP-5 ' -XhoI和3 ' 引物T2A-3 ' -SwaI,WPB513B-1 载体为模板, PCR扩增出GFP-T2A CDS片段,XhoI和MluI双酶切后切胶回收;pTRIPZ的一个衍生载体 pHBTetOE-puro-Gatal,也经过趾O巧...