四环素诱导的条件性基因敲除系统包含两个互补系统,tTA依赖(tetracycline-controlled transactivator protein (tTA) dependent)和rtTA依赖(reverse tetracycline-controlled transactivator protein (rtTA) dependent)的基因敲除系统,又称为Tet-Off系统和Tet-ON系统。在这两个系统中,四环素(tetracycline)或其衍生物多西环素(强力...
原理如图,实验里用到的是Tet-on,起到诱导表达的目的,比较灵敏,过表达效果好,靶向特异,泄漏低来源是原核生物里用来调控耐药性的机制(Tc诱导)dox:多西环素/强力霉素;Tc:四环素 调节蛋白:rtTA;下游反应元件:TRE作用:诱导真核细胞下游基因表达,可以搭载慢病毒,AAV等载体转染,小鼠基因敲除(搭配Cre系统) 长图 长图...
一、什么是Tet-On可诱导过表达系统? Tet-On系统是一种引人瞩目的基因表达调控技术,它允许科研人员根据需要精确操控目标基因的表达。这一系统的突破性在于它能够实现可诱导的、稳定的基因表达,为生物学研究提供了更加灵活和精准的工具。 二、如何实现可操控的基因表达? Tet-On系统的原理基于脱氧胸苷鸟嘌呤(Tet)转录...
631164 Tet-On 3G 诱导表达系统实验流程(clontech)Tet-On® 3G 诱导表达系统实验流程 一、测验 共转染pTRE3G-GOI 载体和pCMV-Tet3G (比例1:4) HeLa 或HEK 293，或靶细胞。Dox诱导目的表达之后，选择合适的特异基因分析方法进行分析目的基因的表达情况，例如：Western blot Northern blot qRT-PCR 基因特异性功能...
Tet-On®3G诱导表达系统实验流程 1 Tet-On®3G诱导表达系统实验流程 一、测验 共转染pTRE3G-GOI载体和pCMV-Tet3G(比例1:4)HeLa或HEK293,或靶细胞。Dox诱导目的 表达之后,选择合适的特异基因分析方法进行分析目的基因的表达情况,例如: Westernblot
简单地说,Tet诱导调控表达系统的基本原理是由诱导药物如Tet改变调控蛋白质的构象,从而控制目的蛋白的表达。研究人员利用TetR和TetO特异结合的特性,发展出了多种类型的Tet调控系统,根据其表达特点可以归为两大类:激活性系统Tet-on和抑制型系统Tet-off。 01Tet-on/off 系统作用原理 ...
其一，它具有可诱导性，这意味着研究人员可以根据实验需求，随时启动或关闭基因的表达。其二，系统一旦启动，基因表达将保持在一个稳定的状态，从而为实验提供了可靠且一致的数据。最后，Tet-On系统在细胞层面上实现了高度精准的基因调控，进一步提升了研究的准确性和可信度。接下来，我们来看看Tet-On系统在哪些科研领域...
这一过程能够人为调节基因表达的时间和强度，对于分子生物学实验至关重要。与tet-on系统相对的tet-off系统，其工作原理则相反。在tet-off系统中，同样需要将带有tet-off元件的载体与目的基因连接，然后转入细胞。在培养基中添加四环素时，tet-off系统会被抑制，从而阻止目的基因的表达。相反，如果停止添加...
五、可诱导过表达案例 项目概要:在 Fadu细胞中可诱导过表达CNTNAP2 实验设计:使用: PiggyBac转座子与Tet-On系统共表达质粒 PiggyBac转座子将目标基因与tet-on系统整合到宿主细胞的染色体中,当系统添加了强力抗生素多西环素(doxycycline)时,目标基因会迅速在高水平上表达。
Tet-on系统由调节表达载体和反应表达载体组成。调节表达载体包含一个人巨细胞病毒早期启动子（PhCMV）和反义Tet转录活化因子（reverse tetracycline transcriptional activator，rtTA）。其中rtTA由反义TetR（reverse TetR, rTetR）和单纯疱疹病毒（HSV）VP16 蛋白C端的一段转录激活区域融合而成。反应表达载体由Tet应答元件...