简述Taqman探针技术的原理。Taqman探针法是高度特异性的定量PCR技术,其核心是利用Taq酶的5’→3’外切核酸酶活性,切断探针,产生荧光信号,由于探针与模板是特
• MGB修饰可以提高探针Tm值,允许设计的探针序列更短; • MGB 探针特异性更强,防止了非特异产物的扩增; • 此外,在 MGB 探针中使用非荧光或暗色淬灭基团 (NFQ),大大降低了背景荧光。 4. Taqman探针设计原则 通常情况下,Taqman探针设计应遵循如下原则: ...
技术原理:以SNP分型检测为例,在PCR过程中,两个探针能与正向引物和反向引物之间的互补序列特异退火结合。当探针以完整形式存在时,由于能量共振转移,荧光基团只发出微弱荧光。特异的探针与相应的等位基因杂交后,DNA聚合酶发挥5’外切酶活性,把报告荧光基团切割下来,从而发出荧光;而SNP探针的错配形式不会引起切割,无荧光...
1. TaqMan探针检测MiRNA的原理是什么? 答:在PCR的过程中,TaqMan MGB探针会特异性地结合到与其互补的序列上,这个序列在下游引物与下游引物之间,如下所示: 图例如下: 在复制时,,上游引物延伸出来的片段就会与TaqMan MGB探针接触,如下所示: 其中,上游引物上的DNA聚合酶(橙色圆圈,带P的那个)会切除掉与序列互补的探针...
了解MGB 探针的更多信息› TaqMan 测定包含一个正向引物、一个或多个 TaqMan 探针和一个反向引物(以指定浓度预混合)。 预设计的 TaqMan 测定经设计和优化可靶向特定基因序列,并且库存充足,可随时购买。其无需进一步设计、优化或进行冗长的熔解曲线分析。只需加入样本和试剂,然后运行实验即可。
TaqMan探针是一种基于PCR技术的方法,通过在反应体系中加入特定的荧光探针,利用探针的荧光信号指示PCR产物的生成,从而实现对基因表达的实时定量检测。TaqMan探针由荧光基团和淬灭基团组成,两个基团分别连接在一条DNA链上。在PCR反应过程中,TaqMan探针与目标基因的特异性序列结合,随着PCR反应的进行,探针被切割成单链DNA,荧...
另外MGB探针包括一个不发光的淬灭基团(NFQ),能够真正消除传统淬灭基团产生的背景荧光信号,提高信噪比,提高检测灵敏度。 图5 TaqMan探针法检测原理 TaqMan探针法相对而言,方法成熟、操作便捷,体系/平台相对开放,临床端认可度高,在注册文件审核等方面更有优势,是最常见的SNP分型方法之一;但是其也有不可忽视的限制性,如...
我们一般推荐使用TaqMan MGB探针进行等位基因分型分析,特别是当传统TaqMan探针超过30个核苷酸时。TaqMan MGB探针包含: 1)位于3’ 端的非荧光淬灭基团——由于淬灭基团不发出荧光,因此SDS仪可以更精确地检测出报告基因染料 。2)位于3’ 端的小沟结合物 – 小沟结合物可提高探针的熔解温度(Tm),缩短探针的长度。3)...