一、探针的基本结构 Taqman探针是一条寡核苷酸,其5""端标记有荧光基团,3""端标记有淬灭基团。在PCR反应过程中,当探针与模板结合后,DNA聚合酶的5""-3""核酸外切酶活性会水解探针,释放荧光信号。 二、关键设计要素 1.长度:探针长度通常在25-32bp之间,确保与模板的特异性结合。对于MGB探针,长度可缩短至13-25bp。
Taqman探针技术要求片段长度在50bp-150bp 引物末端(最后5个核苷酸)不能有超过2个的G和C 探针设计原则探针位置尽可能地靠近上游引物探针长度应在15-45bp(最好是20-30bp),以保证结合特异性检测探针的DNA折叠和二级结构Tm值在65-70℃,通常比引物TM值高5-10℃(至少要5℃),GC含量在40%-70% 探针的5’端应...
二、TaqMan探针设计原则 特异性：探针的特异性是设计过程中最重要的原则之一。探针应与目标序列完全互补配对，避免与其他非目标序列产生交叉反应。因此，在设计探针前，应对目标序列进行充分的分析和比对，确保探针的特异性。长度：探针的长度通常在20-30个碱基之间。较短的探针可能降低特异性，而较长的探针则可能影响杂...
Taqman探针的长度最好在25-32bp之间,且Tm值在68-72℃之间,最好为70℃,确保探针的Tm值要比引物的Tm值高出10℃,这样可保证探针在煺火时先于引物与目的片段结合。因此探针最好是富含GC的保守片段,保证其的Tm值较高。现在有Taqman MGB探针,在TAMER之后再标记一个MGB,可使探针的Tm值较高,即使探针片段较短,也可...
TaqMan探针设计原则 •保持G-C含量在30-80%之间•避免同一碱基重复过多。特别是G，不可超过4个及以上•5’不能是G•尽量使探针中的C多于G•上述两条如果不能满足，则使用互补链上的探针•对于单探针反应，用PrimerExpress软件计算出来的Tm值应当在68-70℃之间，比引物高10℃。长度<30bp 引物设计原则...
1. 先选择好探针,然后设计引物使其尽可能的靠近于探针; 2. 扩增子的长度应不超过400bp,理想的最好能在100-150bp内,扩增片断越短,有效的扩增反应就越容易获得,较短的扩增片断也容易保证分析的一致性; 3. 保持GC含量在20%和80%之间,GC富含区容易产生非特异反应,从而会导致扩增效率的降低,及在SG分析中非特异...
Taqman探针技术仍然是许多实验研究人员进行定量检测的首选,这主要是因为相对于SYBR荧光染料,Taqman探针具有序列特异性,只结合到互补区,而且荧光信号与扩增的拷贝数具有一一对应的关系,因此特异性强灵敏度高,而且条件优化容易;而相对于杂交探针,Taqman探针只要设计一条探针,因此探针设计较便宜方便,而且也能完成基本的定量PCR...
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Taqman探针的设计原则 探针的长度与结构 长度 通常为20-30bp，确保特异性并减少非特异性扩增。结构 由报告基团、淬灭基团和连接臂组成，连接臂长度一般为5-6个脱氧核糖核苷酸。探针的特异性 针对目标序列 确保探针与目标序列完全匹配，避免交叉反应。序列选择 选择基因特异性区域，避免基因组中的高变区。探针的荧光...
real-time-PCRTaqman探针设计、实时多重PCR探针的选择、引物的设计及评价 PAGE PAGE1 Taqman探针的长度最好在25-32bp之间,且Tm值在68-72℃之间,最好为70℃,确保探针的Tm值要比引物的Tm值高出10℃,这样可保证探针在煺火时先于引物与目的片段结合。因此探针最好是富含GC的保守片段,保证其的Tm值较高。现在有Ta...