TA克隆技术起源于1990年代末,由英国科学家平克霍姆(Nathaniel Perkins)和莫瑞尔(Jeffrey Moore)首次提出并发表于《生物技术》杂志上。这种方法主要适用于PCR扩增得到的DNA片段的克隆。 在TA克隆中,PCR扩增得到的目标DNA片段具有具有A尾或T尾的单核苷酸突出结构。转化未线化的质粒时,这些A尾或T尾能够与质粒中的T尾或A...
TA克隆(TA cloing)是一种将PCR产物直接连接到T克隆载体的方法。TA克隆技术是利用了Taq聚合酶具有末端转移酶(TdT)活性,但却不具有3’-5’端外切酶校准活性的特点,可在PCR产物的3’末端加上一个非模板依赖的dA。T载体是一种带有3’-dT突出端的载体,在连接酶的作用下,能高效的与PCR产物连接,极大地提高克隆的效...
TA克隆的具体原理是什么? 答案 TA克隆方法(Original TA Cloning Kit)把PCR片断与一个具有3-T突出的载体DNA连接起来的方法.因为PCR反应中所适用的聚合酶具有末端转移的活性,通常在3加上A.例如:Taq聚合酶同时具有的末端连接酶的功能,PCR反应时在每条PCR扩增产物的3端自动添加一个3-A突出端.只有用经过特殊处理的具...
Invitrogen公司提供的TOPO快速TA克隆试剂盒。我们采用pCR®II-TOPO®体系。 内含TOPO TACloning®reagents (Box 1)和One Shot®Chemically Competent cells (Box 2). TOPO反应盐溶液:200 mM NaCl,10 mM MgCl2。 实验步骤: 总体步骤: PCR反应 进行TOPO反应,连接PCR产物与TOPO载体 用连接好的TOPO克隆转化TOPO...
PCR产物的TA克隆 (DNA的胶回收和连接) 【实验原理】 1.DNA片段回收方法:DNA片段在适当浓度的琼脂糖凝胶中,通上一定电压进行电泳,不同大小的DNA分子由于迁移率的不同而分离开。切下带有所需DNA片段的凝胶,用冻融法、玻璃奶回收法或商品化胶回收试剂盒将目的片段回收纯化。
1.要获得目的基因的TA克隆,PCR产物的特异性要好。 2.PCR产物在TA克隆前要通过纯化。 3.在PCR产物回收、纯化过程中防止外来DNA污染。 PCR产物的TA克隆 通过PCR的方法扩增目的基因片断的过程中,由于往往不清楚目的基因的DNA序列,获得的目的片断通常需要通过TA克隆的方法,重组到T-载体中,通过序列测定清楚DNA序列。由于...
ta克隆的主要步骤如下: 1. 收集卵细胞和体细胞 从动物体内采集成熟卵细胞,并从供体动物体内取出体细胞,如皮肤细胞或其他组织细胞。 2. 去核卵细胞 采用微操作技术,将卵细胞的原核去除。 3. 融合体细胞核与卵细胞 将体细胞核转移到去核卵细胞中,通过电脉冲或其他方式诱导细胞融合,形成一个具有完整基因组的重构...
TA克隆技术(TA cloning)利用Taq聚合酶具有末端转移酶(TdT)活性,但却不具有3'-5'端外切酶校准活性的特点,可在PCR产物的3'端加上一个非模板依赖碱基“A”。pMD18-T是一种高效克隆PCR产物的专用载体,它是由pUC18载体在Xba I和Sal I识别位点间插入一个EcoR V位点,然后用EcoR V进行酶切使质粒线性化,并在它的...
TA克隆文档 TA克隆技术（TA cloning）利用Taq聚合酶具有末端转移酶（TdT）活性，但却不具有3'-5'端外切酶校准活性的特点，可在PCR产物的3'端加上一个非模板依赖碱基“A”。pMD18-T是一种高效克隆PCR产物的专用载体，它是由pUC18载体在Xba I和Sal I识别位点间插入一个EcoR V位点，然后用EcoR V进行酶切使质粒...