终止子(terminatort)是给予rna聚合酶转录终止信号的dna序列。在一个操纵元中至少在构成基因群最后一个基因的后面有一个终止子。对于本发明中的终止子没有任何限定,只要是能用来终止待表达基因转录即可。通常终止子位于待表达基因的下游。 上述表达组件的构建方法,为基因重组的方法,可以进一步描述如下: 提取大肠杆菌bl21(de3)菌株
报告基因构建的实施方法如下:(1)以J61002(BioBrick code BBa_J61002)为模板,替换复制起始pMB1为CloDF13,得到载体pJ61质粒;(2)启动子J23100用启动子PT7替换,编码序列导入到酶切位点SpeI/XbaI之间,并将终止序列rrnB用T7 terminator替换。这里我们选用的编码序列为GFPuv编码基因,并将此质粒命名为pJ61-R(图1h)。
通过分子克隆的方法将T7已报道的存在于T3噬菌体和大肠杆菌中的几种I类终止子T3TΦ、thrattenuator、rrnBT1terminator和rrnCterminator的序列(分别见序列表SEQIDNO.3-6)替换载体pETsnrs-1中I类终止子T7TΦ的颈环结构序列(见序列表SEQIDNO.7)。载体构建成功后用实施例1的通用引物进行PCR扩增,然后利用DNA纯化试剂...