本发明在野生型T7RNA聚合酶基础上通过一个或多个不同位点的氨基酸突变,得到了一系列T7RNA聚合酶突变体,与野生型相比,具有更低的dsRNA副产物,更高的产物完整度,更高的产量或转录活性中的一个或多个.本发明的dsRNA副产物降低的T7RNA聚合酶突变体比野生型T7RNA聚合酶更适用于体外转录体系,副产物极低,纯度更高...
发明名称: T7-RNA聚合酶突变体及其应用 发明人: 朱斌;吴慧 申请人: 苏州近岸蛋白质科技股份有限公司 申请日期: 2021-01-13 申请公布日期: 2021-05-25 代理机构: 南京纵横知识产权代理有限公司 代理人: 徐瑛 地址: 215200 江苏省苏州市吴江经济技术开发区云创路228号3层,4层 摘要: 本发明公开一种T7‑RNA...
基于此难题,恺佧生物通过对野生型的T7 RNA聚合酶的关键位点进行改造,开发了一系列突变体,以研究T7 RNA聚合酶突变体对于减少dsRNA副产物的作用效果。 图2:恺佧生物开发的T7 RNA聚合酶突变体,WT:野生型;C1/C2:商业化的T7 RNA聚合酶 恺佧生物研发人员使用吖啶橙染色法对不同突变体产生的ssRNA和dsRNA进行区分。
基于T7 RNAP突变体的研究还在不断推陈出新。近岸蛋白推出新一代专利产品“T7 RNA聚合酶突变体”(专利号:ZL 2021 1 0044261.3,产品目录号:GMP-E122),经过上百个模板的验证,dsRNA产物在大多数模板上低于0.1ng/μg,在修饰核苷模板上更是可以低于0.01ng/μg,相较于常规T7 RNA聚合酶,数量级降低dsRNA含量。 ▲...
,精氨酸,天冬酰胺,谷氨酰胺,谷氨酸或脯氨酸.上述这种T7RNA聚合酶突变体适合内部含有终止信号的RNA以及末端形成发夹结构的RNA的合成,在体外转录,RNA合成,基因编辑,RNA药物合成,体内蛋白质表达或无细胞蛋白表达体外翻译系统,转录终止子研究,RNA依赖的RNA聚合酶活性研究,生物学转录调控元件合成等方面均能具有广泛应用....
针对mRNA合成过程中产生的副产物dsRNA杂质激活天然免疫,而纯化去除dsRNA会增加制造成本,降低产量,且通常会降低mRNA完整性的痛点,近岸蛋白重磅发布了专利产品“T7 RNA聚合酶突变体”(专利号:ZL 2021 1 0044261.3),经过上百个模板的验证,dsRNA产物在大多数模板上低于0.1ng/μg,在修饰核苷模板上更是可以低于0.01ng/μ...
近岸蛋白坚持源头创新,致力于为整个行业提供创新、有效、可靠的全流程解决方案。T7 RNA聚合酶突变体已完成GMP级产品大规模生产,显著降低dsRNA含量,简化纯化工艺,减少帽结构使用量,降低原料成本,真正实现降本增效,助力mRNA药物研发及生产企业快速推进项目。 近岸蛋白新一代T7 RNA聚合酶突变体限时试用中,欢迎扫码咨询: ...
为了兼顾T7 RNA聚合酶的产量并监测体外转录反应中dsRNA的含量,镁孚泰生物参照优化后的转录模板,精心设计了多个分子信标(FRET RNA探针),分别靶向目标mRNA产物的不同区域,将反应物产量、完整度以及体系内dsRNA含量等信息与荧光信号关联,体系的荧光强度越强,突变体的性能越有优势。理论上,该筛选方法可按不同探针的荧光强...
将反应模板更换为RNA时还可负向筛选突变体的RDRP活性,提升T7 RNA聚合酶的模板选择能力。此外,在液滴反应体系中添加修饰核苷酸、帽类似物,以及提高反应温度还可以进一步筛选耐受非天然底物、热稳定性提升的T7 RNA聚合酶突变体。 根据文库大小,镁孚泰生物分别开发了基于荧光激活液滴分选(FADS)的超高通量筛选流程(图2...
为了兼顾T7 RNA聚合酶的产量并监测体外转录反应中dsRNA的含量,镁孚泰生物参照优化后的转录模板,精心设计了多个分子信标(FRET RNA探针),分别靶向目标mRNA产物的不同区域,将反应物产量、完整度以及体系内dsRNA含量等信息与荧光信号关联,体系的荧光强度越强,突变体的性能越有优势。理论上,该筛选方法可按不同探针的荧光强...