(1)转录反应模板的获取及纯化 通过分子克隆将t7启动子及egfp等不同基因的sgrna序列插入载体puc19中,不同基因的sgrna序列的前20nt因基因种类存在序列差别,后面序列为grna骨架保持不变。如序列表seqidno.12-19所示为靶向不同基因(plk1、bmpr1b、tbce、egfp、nod、lsd、mcherry、mosdt1)的序列信息。使用pcr方法扩增...
如图7A和图7B所示,野生型T7 RNAP合成的RNA引发了最强烈的免疫反应,而来自突变体的RNA则显示出较弱的反应。具体来说,用突变体Mut11 RNA处理的细胞IFN-β mRNA仅为用野生型处理细胞的9.7%,其蛋白表达量为12.93 pg/mL。此外,不同T7 RNAP生成的mRNA在EGFP表达的数量和质量上没有显著差异(图7C),满足了工业应...
总的来说,三种工程菌株在36小时的生存率仍然很高,质粒在细胞中稳定存在,表明可以通过延长发酵时间进一步提高自溶性蛋白质的产量。 图2 不同菌株中GDH-EGFP的表达 2.3工程菌株在膜蛋白生产中的应用 研究进一步探讨了工程菌株在三种膜蛋白Codb、Ecb和Yidc表达中的应用。结果显示,在Codb生产中,加入诱导剂后,BL21 (DE...
整个片段克隆到puc57载体上。完成表达载体的构建,下一步将egfp基因克隆到该表达载体上,设计含bamhi和noti双酶切位点的上下游引物,egfp-上:5'tcagggatccatggtgagcaagggcgagg3'(bamhi)egfp-下:5'tagccgccggcgttaatgatgatgatgatgatggtgatgatgcttgtacagctcgtcc3'(noti)以pires2-egfp质粒为模板,扩增egfp片段,双酶...
本发明公开了一个基于费氏弧菌群体感应系统和T7表达系统的迭代基因电路,该基因电路包括费氏弧菌的信号分子蛋白基因luxI,受体蛋白基因luxR,感应信号分子受体蛋白复合体的启动子序列PluxI(1),T7 RNA聚合酶基因T7 RNApoly和用于表征电路强度的绿色荧光蛋白egfp.本发明基因电路是一种不依赖诱导剂,可以在任意宿主菌中利用T...
3) 实验中如需要固定细胞,比如在检测凋亡的同时检测细胞周期,只能选用Annexin V-FITC,而不能选用Annexin V-EGFP,因为在固定过程中EGFP会变性导致丧失激发荧光的能力。固定前需要先将细胞与Annexin V-FITC进行孵育,并用binding buffer洗掉未结合的Annexin V-FITC。因为固定过程中细胞通透性增加会产生细胞碎片,可以和Annex...
课题组以增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein,EGFP)和靶向Her2的抗体模拟亲和体(ZHER2:2891)作为目标产物,并在对应基因中插入琥珀终止密码子对应的TAG。 为实现生产解偶联,他们在大肠杆菌BL21(DE3)中表达来自T7噬菌体编码RNA聚合酶抑制剂的gp2,在确保T7RNA聚合酶不受影响的情况下抑制了大肠杆菌自...
pCMV-T7-SpG-P2A-EGFP (RTW4177)质粒 货号:#139988-20ul 货号产品名称规格库存价格数量购买 #139988-20ulpCMV-T7-SpG-P2A-EGFP (RTW4177)质粒20ul 立即咨询 +- 产品介绍 相关产品 》产品信息 货号名称规格别名 #139988pCMV-T7-SpG-P2A-EGFP (RTW4177)质粒 ...
a cell-free TxTl synthesis of eGFP, with two top candidate promoters, end point fluorescence measured after 8-hour reactions. b: RT-qPCR measurement of mRNA abundance in TxTl GFP translation of classic T7 promoter, new T7 Max promoter, and no template control sample. Samples were collected...
3) 实验中如需要固定细胞,比如在检测凋亡的同时检测细胞周期,只能选用Annexin V-FITC,而不能选用Annexin V-EGFP,因为在固定过程中EGFP会变性导致丧失激发荧光的能力。固定前需要先将细胞与Annexin V-FITC进行孵育,并用binding buffer洗掉未结合的Annexin V-FITC。因为固定过程中细胞通透性增加会产生细胞碎片,可以和Annex...