此外,t4DNA聚合酶还可以修复DNA上的损伤,使其恢复原有的双链结构。这些实验对于研究DNA复制和修复机制非常重要。 二、PCR技术中的应用 PCR(聚合酶链反应)是一种在分子生物学中常用的技术,用于扩增DNA片段。在PCR反应中,t4DNA聚合酶起着关键的作用。它能够将DNA模板上的双链DNA解旋成两条单链DNA,并在适当的温度...
T4 DNA聚合酶由于同时具有5'→3'DNA聚合酶活性和3'→5'DNA外切酶活性,可以用于将5'端突出末端补平或3'端突出末端削平。T4 DNA聚合酶的3'→5'DNA外切酶活性对于单链DNA要比双链DNA活性更高,即单链DNA要比双链DNA中的非配对链部分更容易被T4 DNA聚合酶所消化。T4 DNA聚合酶的3'→5'外切酶活性比Klenow Fr...
T4 DNA聚合酶(T4 DNA Polymerase) ,是一种模板依赖的DNA聚合酶,可以结合在有引物的单链DNA 模板上,从5' →3'方向催化DNA合成反应。T4 DNA Polymerase具有3' →5'外切酶活性,但不具有5' →3'外切酶活性,可以用于将DNA黏性末端的平滑化,也就是5'突出末端补平或3'突出末端削平。 图2. T4 DNA Polymerase作...
对单链DNA作用比对双链DNA更强,外切核酸酶活性比Klenow片段强200倍。 用途: ①补平或标记限制性内切酶消化DNA产生的3’凹端 ②对带有3’突出端的DNA分子末端标记; ③标记用作探针的DNA片段; ④将双链DNA末端转化成为平端; ⑤延伸结合于单链DNA模板上的诱变寡核苷酸引物。
T4 DNA 聚合酶用于标记 3′-DNA 的末端。通过置换反应实现广泛标记,其中 3′-酶的核酸外切酶活性首先消化 dsDNA,产生具有凹陷 3′-终点。在随后加入标记的 dNTP 时,T4 DNA 聚合酶的聚合酶活性再延长 3′沿模板长度结束。来自 大肠杆菌 的核酸外切酶 III 可用于生成部分单链 dsDNA 用于随后的聚合反应。标记为高...
T4-DNA聚合酶在作用上与大肠杆菌DNApol不同，它不具备5'→3'外切酶活性。在使用有缺口的双链DNA作为模板时，需要基因32蛋白的辅助，因为基因32蛋白在T4DNA复制中的作用类似于大肠杆菌单链结合蛋白，它在复制叉处与单链DNA结合，有助于双链进一步打开并保持单链状态，以便于新生链的合成。当使用单链...
T4 DNA连接酶可以修补双链DNA、双链RNA或DNA/RNA杂合链上的单链切口，使两个相邻的核苷酸连接起来，在DNA修复和重组中起着重要的作用。在传统的酶切酶连法载体构建过程中，T4 DNA连接酶可以搭配限制性内切酶一起完成酶切酶连实验。它可以催化双链DNA的5’-P末端和3’-OH末端之间形成磷酸二酯键，并且对黏性末端...
T4 DNA 聚合酶对 5´→3´ 方向的 DNA 合成起到催化作用,需要使用模板和引物。该酶具有 3´→5´ 核酸外切酶活性,比 DNA 聚合酶 I(E. coli)中发现的活性高得多。与大肠杆菌(E. coli)DNA 聚合酶 I 不同,T4 DNA 聚合酶不具有 5´→3´ 核酸外切酶功能。