每个循环结束时,收集荧光信号强度,通过将荧光强度与循环数作图,qPCR仪生成扩增曲线,其表示在整个PCR过程中产物的累积,通过这个过程,即可实现量化。如果样品中特定的序列(DNA或RNA)丰富,则在较早的循环中观察到扩增,Ct值小;如果序列稀少,则在稍后的循环中观察到扩增,Ct值大。 此SOP将涵盖总RNA提取和两步法 逆转录 ...
游离状态下,SYBR Green I发出微弱的荧光,一旦与dsDNA结合,其荧光增加1000倍,一个反应发出的全部荧光信号与出现的dsDNA量成比例,且会随扩增产物的增加而增加。所以通过检测PCR反应液中的荧光信号强度,可以对目的基因进行准确定量,同时还可以测定扩增的目的DNA片段的熔解温度。 产品优势 SYBR Green qPCR Mix(CSB-DKT030...
优点：检测特异性强；灵敏度高；适合进行多重qPCR检测；PCR后续无需处理，节省时间和原料成本。缺点：需...
Fig. 1 一步与两步RT-qPCR流程对比 Table 1 RT-qPCR一步法和两步法比较 AllStart®/ATG® HSOne Step RT-qPCR SYBR Green Kit (ATG #R305 & ATG #R405) 基于 SYBR Green I 嵌合荧光法,针对以RNA为模板 (如RNA类病毒) 的荧光定量PCR快速检测设计,结合使用基因特异性引物,可使逆转录和qPCR反应在一...
基于vhhp2基因的sybr green i实时定量pcr检测哈维氏弧菌方法的建立 development of a sybr green i real-time pcr for detection of vibrio harveyi based on the vhhp2 gene 热度: SYBR Green Quantitative PCR Protocol 热度: 相关推荐 Protocol for Quantitative PCR (qPCR) - SYBR Green assay Written ...
实时荧光定量PCR检测系统，即qPCR，是一种先进的核酸分子诊断技术，1992年Higuchi报告了实时荧光定量PCR技术，通过检测溴化乙锭的含量实时监控PCR反应进程，从而实现目标基因的准确定量。SYBR Green I是一种新型定量荧光染料，实际名称为二（4-羟基苯基）-6（4-甲氧基苯基）-三甲基吡啶三乙酸铵，由Invitrogen...
以提高引物的质量。质量检测：收到引物后，可通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计等方法检测引物的纯度和浓度，确保引物质量符合要求。实验验证：在正式进行qPCR 实验之前，先进行预实验，使用阳性模板和阴性模板对引物的特异性、扩增效率等进行验证，如有条件可对扩增产物进行测序确认。
SYBR Green qPCR引物设计原则是一种指导性的设计方法,可用于指导研究人员开发有效的qPCR探针引物。 SYBR Green qPCR引物设计原则主要包括: (1)引物结合特异性:引物在qPCR反应中用于特异性结合DNA模板,以引起聚合反应。因此,研究人员应密切关注引物体系中两个特异性配对序列(3’端Tm值> 55℃)的准确性,以及引物在不...
默克生命科学实验分享｜通用SYBR Green qPCR实验方案 技术槪述：SYBR GREEN QPCR 随着具有荧光检测功能的热循环仪的发展，PCR具有了新的创新应用。在常规PCR中，关键结果是在该过程后产生的最终扩增子数量。实时或定量PCR和RT-PCR利用DNA扩增的线性原理，确定样品中已知序列的绝对或相对量。通过在反应中使用荧光报告基团...