qPCR染料法的原理 qPCR染料法在体系中额外加入了非特异性双链DNA荧光染料(通常为SYBR Green I),游离的荧光染料本身不发光或只发出极弱的荧光信号,但染料可以非特异地结合在双链DNA小沟上,并发出较强的荧光信号。随着PCR循环数的增加,越来越多的染料与双链DNA结合,产生的荧光量与双链DNA含量成正比。因此可以通过检...
1、 DNA结合染料—SYBR Green I 法 • 原理:SYBR Green I 是一种DNA结合染料,其与双链DNA结合后,荧光大大增强,DNA与染料结合所释放的荧光量与dsDNA的数量成正比。因此,检测到的荧光信号可反映出PCR体系存在的双链DNA数量。 • 特征:可逆荧光,最大吸收波长497nm,最大发射波长520nm。 • 适用情况:非特异...
【SYBR Green I法引物设计要点】在运用SYBR Green I染料法进行qPCR实验时，引物设计相较于普通PCR扩增引物，需要额外注意以下几个关键原则：1、在运用SYBR Green I染料法进行qPCR实验时，首要原则是选择具有高度特异性的引物对，以确保扩增产物不会形成二级结构。2、扩增的熔解温度（Tm）应控制在约60℃，因为这是SYB...
一.SYBR Green I法原理 1.Sybr Green I是一种结合于小沟中的双链DNA结合染料,在PCR反应体系中,Sybr荧光染料特异性地掺入DNA双链与双链DNA结合后,发射荧光信号,而不掺入双链中的Sybr染料分子不会发射任何荧光信号。从而保证与PCR产物的增加完全同步。
SYBR Green I法是进行定量qpcr实验的常用方法,本文介绍了SYBR Green I法的原理、优缺点,以及进行定量qPCR的常见问题和解决方法。 一.SYBR Green I法原理 1.Sybr Green I是一种结合于小沟中的双链DNA结合染料,在PCR反应体系中,Sybr荧光染料特异性地掺入DNA双链与双链DNA结合后,发射荧光信号,而不掺入双链中的...
qPCR )中,荧光信号是由荧光探针或荧光DNA结合染料(如SYBR Green)产生,其强度与PCR产物分子(扩增子)的数量成正比。每个循环结束时,收集荧光信号强度,通过将荧光强度与循环数作图,qPCR仪生成扩增曲线,其表示在整个PCR过程中产物的累积,通过这个过程,即可实现量化。如果样品中特定的序列(DNA或RNA)丰富,则在较早的循环...
作用原理 图1.在游离状态下,SYBR Green I发出微弱的荧光,收集不到荧光,但一旦与双链DNA结合后,荧光大大增强,可以收集到荧光。 实验结果 使用CSB-DKT030,与某品牌产品的实验结果对比 图2.由荧光定量PCR曲线,可知CSB-DKT030荧光信号更强。 图3.从熔解曲线可知CSB-DKT030熔解峰单一、集中,表明其扩增产物特异性更...
工作原理 SYBR Green qPCR Master Mix (2×) 的工作原理结合了传统PCR和荧光检测技术：变性（Denaturation）：在PCR反应的高温变性阶段，DNA双链被加热至95°C，分开成单链。退火（Annealing）：温度降低，引物与目标DNA单链结合。SYBR Green染料在这一阶段不发荧光，直到DNA链被合成。延伸（Extension）：在适中的...