本文将为你介绍SYBR Green I 染料法设计引物的原则。 1. 引物长度 在设计引物时,需要考虑引物的长度。一般来说,引物的长度应该在18到25个碱基对之间。引物过短可能导致特异性不足,引物过长则可能导致PCR效率下降。合适的引物长度是确保PCR效果的关键之一。 2. 引物GC含量 引物的GC含量是指引物中鸟嘌呤(Guanine)...
以下是sybr green染料法的引物设计原则: 一、引物长度 1. 引物长度一般在18-24个碱基对之间。过长的引物可能使PCR反应失败,而过短的引物可能导致非特异性扩增。 二、引物Tm值 2. 引物的Tm值应该尽量接近。Tm值的计算可以通过一些软件如OligoCalc或Primer3进行预测。Tm值的差异过大可能会导致引物的不对称性,从而...
引物设计原则 SYBR Green I方法引物设计标准 引物长度17～25mers; GC含量40%～60%; 一对引物的Tm不能相差太大,尽量避免超过2℃; 避免引物自身或一对引物之间形成4个或4个以上连续配对; 避免引物自身形成环状发卡结构; 引物的3'端碱基最好为G或C,尽量避免3'端碱基为T; 目的基因和内参基因所扩增的PCR产物...
SYBR Green qPCR引物设计原则主要包括: (1)引物结合特异性:引物在qPCR反应中用于特异性结合DNA模板,以引起聚合反应。因此,研究人员应密切关注引物体系中两个特异性配对序列(3’端Tm值> 55℃)的准确性,以及引物在不同条件下能够结合DNA模板的特异性。 (2)引物安全性:引物的设计应避免在qPCR反应过程中与目标DNA片段...
SYBRGreen I与双链DNA结合后发出荧光,可以通过检测反应体系中的SYBRGreen I荧光强度,达到检测PCR产物扩增量的目的。 Real Time PCR引物设计原则 Forward Primer和Reverse Primer 进行Real TimePCR,引物设计非常重要。引物关系到PCR扩增的特异性、高效性等,可以参照以下原则进行引物设计: u 引物长度:18-30bp。 u GC...
通用原则 1 先选择探针设计引物使其尽能靠近于探针 2 扩增度应超400bp理想能100－150bp内扩增片断约短效扩增反应越容易获较短扩增片断容易保证析致性 3 保持GC含量20％80％间GC富含区容易产非特异反应导致扩增效率降低及SG析非特异信号 4 保证效率重复性应避免重复核苷酸序列尤其G（能4连续G）5 引物...
明确基因后，直接点击 ，进入人IL6 基因的主页。 上海捷瑞生物工程有限公司（3）进入人 IL6 基因的主页后，往下拉动网页，看到如下界面。由于我们设计 引物的模板是mRNA，所以我们要找到该基因的转录本信息。点击“reference sequence details”。 （4）得到如下界面，我们看到，人IL6 基因在NCBI 里的...
上海捷瑞生物工程有限公司 如何设计SybrGreen法荧光定量PCR引物 荧光定量PCR是利用荧光定量PCR仪(如ABI7500、stepone、ROChe LightCycler、Bio-RadCFX96等)通过实时追踪PCR每一步循环的荧光信号 值来达到对起始模板量的定量分析。一次成功的荧光定量PCR反应除了需要稳 定的仪器、优质的Taq酶、比较好的模板质量,更需要高质...
2×SYBR Green qPCR Master Mix (Low ROX) 1 mL 5×1 mL 15×1 mL 说明书 1份 实验前准备 1. Real Time PCR 扩增仪; 2. 实验专用反应管或反应板; 3. PCR 引物(参考引物设计原则); 4. 微量移液器和枪头(高压灭菌)。 操作步骤 1.推荐PCR反应体系: ...
关于SYBR Green |的描述,正确的是()A.荧光染料的成本低B.适用于任何反应体系C.操作简单D.特异性强E.不需要对引物或探针进行预先特殊的荧光标记