在一些需要高表达量 shRNA 以快速实现基因沉默的实验中，U6 启动子是一个不错的选择，如在细胞系的瞬时转染实验中。H1 启动子：H1 启动子同样是 RNA 聚合酶 III 依赖的启动子，它的转录活性相对 U6 启动子稍低，但具有更好的可控性。H1 启动子可以通过一些诱导型系统进行调控，例如在某些诱导型载体中，加入特...
一般会在PLKO.1-puro载体的U6启动子区域之后将shRNA序列插入,而pLK-puro空载体上用于连接shRNA的两个酶切位点分别是AgeI和EcoRI 即shRNA序列应该为: 最终,我们需要确定能够针对目标基因的Sense序列,然后将该序列进行补全即可得到目标shRNA序列: 2、设计步骤 (1)设计shRNA 以鼠FTO基因为例设计shRNA,打开shRNA设...
(1) RNA聚合酶IIII型启动子终止信号常见于Poly(T)结构,因此设计shRNA时需要避免靶向序列中连续出现四个及以上的T碱基。 (2)当选择U6或7SK启动子时,建议靶向序列以G碱基开头,以获得最佳的表达效果。 (3)可多设计几条shRNA序列,提高基因沉默的效率。 本文作者是"小米"同学,在获得授权后,实验老司机将本文发表于...
在一些需要高表达量 shRNA 以快速实现基因沉默的实验中,U6 启动子是一个不错的选择,如在细胞系的瞬时转染实验中。 H1 启动子:H1 启动子同样是 RNA 聚合酶 III 依赖的启动子,它的转录活性相对 U6 启动子稍低,但具有更好的可控性。H1 启动子可以通过一些诱导型系统进行调控,例如在某些诱导型载体中,加入特定的...
表达shRNA常用的polⅢ型启动子有U6和H1，由于构建序列较短，shRNA能够轻易的插入病毒载体，但是想实现特定组织中的基因沉默，少不了组织特异性启动子的助力，然而U6和H1并不具有组织特异性。基于miRNA骨架的shRNA干扰载体，采用了pol II型启动子(包括多种组织特异性启动子)驱动，从而实现特定组织中的基因沉默。目前...
pDC316-ZsGreen1-shRNA质粒是一个Admax腺病毒RNA干扰载体,可通过Pst1和BamHI酶切位点连入shRNA片段,并由U6启动子驱动。配套质粒辅助包装质粒:pBHGlox(delta)E1,3Cre AdMax腺病毒包装系统简介: AdMax腺病毒包装系统,将携带外源基因的腺病毒穿梭质粒(pDC316-mCMV-EGFP,pDC316-ZsGreen1-shRNA)与携带腺病毒大部分基因...
pLKO.1载体的U6启动子可以保证RNA高效转录,但是酶切位点比较单一,仅有AgeI和EcoRI。同时,sigma公司常用的骨架载体也是这个。 pLKO.1载体模式图 shRNA序列一般为: Forward oligo: 5’ CCGG—21bp sense—CTCGAG—21bp antisense—TTTTTG 3’ Reverse oligo: ...
shRNA:小发卡或短发卡RNA(a small hairpin RNA or short hairpin RNA,shRNA)是一段具有紧密发卡环(tight hairpin turn)的RNA序列,常被用于RNA干扰沉默靶基因的表达。利用载体把shRNA导入细胞,载体中的U6启动子确保shRNA总是表达;shRNA的发卡结构可被细胞...
质粒载体是最常见的shRNA表达载体之一,它们通常包含RNA聚合酶III型启动子(如U6或H1启动子),这些启动子能够驱动shRNA的转录。质粒载体易于构建和扩增,适用于多种细胞类型的瞬时或稳定表达。通过将编码shRNA的DNA序列克隆到质粒载体的启动子下游,可以实现shRNA在细胞内的表达。
一张图就能解释这个问题! 小发夹RNA(英语:short hairpin RNA,缩写shRNA)是一种形成发夹(hairpin turn)结构的RNA序列,可以经由RNA干扰(RNAi)使基因沉默。shRNA可利用载体导入细胞当中,并借由U6启动子来确保shRNA的表达。另外,shRNA可经由切割转变成为siRNA。