pLKO.1含WPRE吗？不含。WPRE（美洲旱獭肝炎病毒转录后调控元件）已知具有增强转基因转录的能力，但对于shRNA转录并非必需。此外，有些人认为WPRE可能会影响致癌基因活性，对体内和临床实验可能具有启示意义。
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附录1. shRNA启动子 多数的siRNA表达载体依赖RNA聚合酶III 启动子(pol III)中的一种,操纵一段45—50nt的发夹结构RNA(small hairpin RNA,shRNA)在哺乳动物细胞中的表达,shRNA在细胞内会自动被加工成为siRNA,从而引发基因沉默或者表达抑制.这一类启动子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6启动子和人H1启动子等。采用...
克隆进MISSION®TRC shRNA的pLKO.1转运载体与标准2型质粒(含有rev基因的包装载体和包膜载体)或3型质粒(不含rev基因的载体,包膜载体和rev表达载体)包装系统相容。 哪些限制性位点可用来克隆shRNA序列?我之所以对此感兴趣,是因为我希望获得部分shRNA结构,但我是否需要将序列插入到不同的骨架载体?
pLKO.1载体是否是基于HIV的载体?如果是的话,是否存在安全问题? pLKO.1载体载体是基于慢病毒(HIV)的质粒。这种载体被认为是生物安全性2级材料,由于其改良特性(去除了大量蕴含着HIV病毒毒力的附属基因、最大限度减少病毒微粒的基因组含量,无复制能力及自灭活特性)而无法在感染宿主细胞之后产生病毒,因而可以安全使用。
是的，pLKO.1载体是基于慢病毒(HIV)的质粒。它被归类为生物安全性2级材料，因为经过改良，去除了大量HIV病毒毒力的附属基因，最大限度地减少了病毒微粒的基因组含量，并且具有无复制能力及自灭活特性。这意味着它无法在感染宿主细胞后产生病毒，因此可以安全使用。具体要求请咨询所属机构的生物安全专员。...
,加1ul,退火buffer(可以用不含dNTP和酶的PCR buffer),95℃ 3min,自然降温到室温。 将载体酶切尽可能保证载体全部双酶切切开,可以选择NEB没有星活性的的酶。 取1ul 退火后的溶液,与载体(20-50ng就够了)连接并转化。 如果有载体自连对照为阴性,可以取两个单克隆提质粒KpnI单酶切,如果有能切出一个1300bp左...
1.选择基因 例如GeneName:TP53Accession:NM_000546.5 2.寻找靶点 http://rnaidesigner.thermofisher/rnaiexpress/setOption.do?designOption=shrn a&pid=-7168952604080645646 输入基因序列号,或者粘贴序列 点击RNAi设计 3.靶点选择 (选择星号比较多的2-3个作为目的序列) ...