对于CRISPRa,将三个质粒dCAS-VP64_Blast(Addgene#61425),MS2-P65-HSF1_Hygro(Addgene#61426)和携带有EGFP的针对每个正向筛选lncRNA的sgRNA通过瞬时转染递送到细胞中。转染3天后通过FACS富集EGFP阳性的细胞,然后进行细胞致死性检测。实时PCR使用RNAprepPureMicro试剂盒(TIANGEN,DP420)提取培养细胞的RNA,然后用Quant...
Cas9的两个domain, HNH 和 RuvC负责剪切 HSF1-p65-MS2 MS2: 用来和aptamer结合 p65:选用p65的TAD部分 HSF1:选用HSF1的TAD部分 不同转录因子的TAD部分相互叠加,有synergistic的效果,要比单一的TAD强。 PS: 目前还有好多转录因子的TAD没有尝试,效果也许会比VP64/p65/HSF1组合更好。 CRISPR 基因激活在实验室是...
通过将蛋白质相互作用RNA适体MS2添加到 sgRNA 中,实现了一种称为协同激活介体 (SAM) 系统的改进: MS2可招募p65AD与热休克因子1(HSF1)融合蛋白。与单独的 dCas9-VP64 相比,SAM 技术与 dCas9-VP64 结合使用,进一步增强了内源基因的激活效率。具体操作过程:向实验细胞共转导两种分别携带dCas9:VP64和MS2:P65:HS...
采用串联sgRNA同步激活多个猪内源性干细胞因子转录活性的方法本发明提供了一种采用串联sgRNA策略同步激活猪多个内源性干细胞因子的方法,首先利用杀稻瘟菌素和潮霉素药物筛选并构建了能稳定表达dCASVP64和MS2P65HSF1的PK15细胞株(PK15dCas9MS2).分别设计和构建能靶向猪干细胞因子谢胜松周玲刘敏苗义良刘海龙徐德全...
HH-CAS-049 lenti MS2-P65-HSF1_Hygro Plasmid#61426 HH-CAS-048 lenti sgRNA(MS2)_puro backbone Plasmid#73795 HH-CAS-047 pCDNA-dCas9-p300Core HH-CAS-046 eSpCas9(1.1) #71814 HH-CAS-046 HH-CAS-045 pX459 V2.0 CBH启动子 CRISPR/Cas9载体;基因敲除载体 puro HH-CAS-044 pHAGE-To-dCAS9 诱...
HH-CAS-049lenti MS2-P65-HSF1_Hygro Plasmid#61426 HH-CAS-048lenti sgRNA(MS2)_puro backbone Plasmid#73795 HH-CAS-047pCDNA-dCas9-p300Core HH-CAS-046eSpCas9(1.1) #71814 HH-CAS-046 HH-CAS-045pX459 V2.0 CBH启动子 CRISPR/Cas9载体;基因敲除载体 puro HH-CAS-044pHAGE-To-dCAS9 诱导型CRISPR...
SAM MS2-P65-HSF1 PlasmidsLentiviralAmp, GFP Amp, Hygro$50Order Broad Institute Plasmid Collection Broad Institute Plasmids are generated by the Broad Institute of Harvard and MIT. These plasmids contain a 17bp-1.8kb expressible linker in lieu of a customized sgRNA sequence, which can be modified...
[0176]结果显示含特异性激活RSPO2的CRISPR-Cas9系统的慢病毒载体(lenti_sgRNA_RSPO2_1、lenti_sgRNA_RSPO2_2和lenti_sgRNA_RSPO2_3)能有效地激活RSPO2基因表达。 [0177]实施例7慢病毒包装 [0178]质粒dCAS9-VP64_GFP(Feng Zhang,Nature 2014)表达dCAS9和VP64蛋白、质粒lenti MS2-P65-HSF1_Hygro(Feng Zhang,...
When these cells are transfected with an MS2-tagged sgRNA targeting the promoter region of PD-1 (Programmed Cell Death 1, PDCD1, CD279, GenBank Accession #NM_005018), dCas9-VP64 and MS2-P65-HSF1 are recruited to the site in the genomic DNA and begin transcription, inducing PD-1 expres...
而在另一个载体上,MS2蛋白已经与P65、HSF1蛋白融合。其中,P65、HSF1是两个转录因子。因此,当两个载体同时进入同一个细胞后,lentiSAMv2质粒表达“... 分享1赞 贾韦国吧 夜做日息 张锋改良CRISPR筛选技术律成簇的间隔短回文重复CRISPR与内切酶Cas9的组合,原本是细菌抵御病毒的重要武器,现在这一组合已经成为了一个...