2.PAM序列识别:PAM序列是Cas9蛋白识别并结合目标DNA所必需的短序列。在设计sgRNA时,必须确保目标序列紧邻PAM序列,以便Cas9蛋白能够准确识别并切割。 3.sgRNA结构设计:根据目标序列和PAM序列,设计出具有特定结构的sgRNA。这通常包括一个与目标序列互补的间隔区(spacer)和一个与Cas9蛋白结合的支架区(scaffold)。间隔区的序列...
1.设计gRNA模板 1)在NCBI网站获得目的基因cDNA、mRNA,标注出外显子区,注意要把不同的外愚子分别标注出来。找出蛋白N端保守区,範序列选择在保守区的前端相对应的外显子。 3)将外显子序列提交于麻省理工大学张峰gRNA设计网站。 4)选出一对靶序列,并综合以下几个因素:分数较高,反向相反,距离相差几千bp,最好在1...
1.设计gRNA模板 1)在NCBI网站获得目的基因cDNA、mRNA,标注出外显子区,注意要把不同的外愚子分别标注出来。找出蛋白N端保守区,範序列选择在保守区的前端相对应的外显子。 3)将外显子序列提交于麻省理工大学张峰gRNA设计网站。 4)选出一对靶序列,并综合以下几个因素:分数较高,反向相反,距离相差几千bp,最好在1...
1.设计gRNA模板 1)在NCBI网站获得目的基因cDNA、mRNA,标注出外显子区,注意要把不同的外愚子分别标注出来。找出蛋白N端保守区,範序列选择在保守区的前端相对应的外显子。 3)将外显子序列提交于麻省理工大学张峰gRNA设计网站。 4)选出一对靶序列,并综合以下几个因素:分数较高,反向相反,距离相差几千bp,最好在1...