sgrna 合成序列通常由一个引导 RNA(guide RNA) 和一个 passenger RNA( passenger RNA) 组成。 sgrna 的作用是通过 RNA 干扰技术来沉默或下调特定基因的表达。这种技术利用了细胞的自然 RNA 干扰机制,通过将 sgrna 合成序列引入细胞中,使得细胞内的 RNA 干扰复合物能够识别并结合目标基因的 mRNA,从而导致 mRNA 的...
sgRNA合成 化学合成sgRNA一般是指通过特殊算法设计,利用高通量化学合成平台,高效合成序列100%正确,且具有功能性蛋白敲除能力的sgRNA。同时,在sgRNA的5’和3’端各加3个硫代和甲氧基修饰,可以提高sgRNA稳定性,并降低脱靶效应【4】。 sgRNA转染方式 在CRISPR-Cas9系统中,利用Cas9和化学合成sgRNA形成的核糖核蛋白(RNP)替...
首先,在细胞核内,sgrna 的前体被合成。sgrna 前体通常是由聚合酶Ⅱ(Pol II)转录而来,生成的初始产物称为原始 sgrna(precursor sgrna,psgrna)。随后,psgrna 会经过一系列的加工过程,如剪切、修饰等,最终生成成熟的 sgrna。这个过程主要发生在细胞核外的细胞质中,由多种酶参与完成。 3.sgrna 的应用领域 sgrna 在...
sgRNA的化学合成原理是通过合成和连接两部分序列得到最终的sgRNA分子。 合成sgRNA的第一部分是crRNA(CRISPR RNA),它是由一段长度为20个碱基的目标DNA序列和一段长度为12个碱基的PAM(Protospacer Adjacent Motif)序列组成。这两部分序列需要通过化学合成的方法合成,并在合成过程中加入相应的保护基团来保护碱基。 接下来,...
sgRNA的合成是CRISPR-Cas9技术的关键步骤之一,合成质量和效率直接影响到后续基因编辑的成功率。本文将深入探讨sgRNA合成的原理及相关技术。 二、sgRNA合成原理 sgRNA的合成通常由两个关键步骤组成:转录和修饰。转录是将sgRNA序列通过体外转录反应合成RNA分子,而修饰则是对转录得到的RNA进行化学修饰,以提高其稳定性和特异性...
sgrna 合成序列的生成过程是通过一种称为 RNA 干扰(RNAi)的机制实现的。RNAi 是一种自然的生物学过程,可以通过剪切和降解 RNA 分子来调控基因表达。在这个过程中,sgrna 作为 RNAi 的一部分,与靶 RNA 结合并引导核酸酶剪切靶 RNA。sgrna 的生成通常由一个称为 RNA 聚合酶 II(RNA polymerase II)的酶催化完成。
sgRNA合成 sgRNA(single guide RNA)是CRISPR/Cas9 基因编辑系统的“指挥中心”,可以引导 Cas9 对 DNA 进行定点编辑。化学合成的sgRNA通常细胞毒性低,通过添加多种修饰可增强其稳定性,从而降低脱靶效应。与体外转录sgRNA和质粒sgRNA相比,具有成本低、编辑效率高,批次间稳定性高等优势。
我们通过尿素-TBE胶、ESI-MS、体外酶切和细胞实验等方法,从化学质量及生物有效性角度分别验证了化学合成的sgRNA。 尿素-TBE跑胶结果 通过化学合成的sgRNA通过尿素-TBE跑胶结果(图1),我们可以看到sgRNA主条带清晰且单一。图中,最左端为可靠来源的60nt的RNA,右端四条为99nt的sgRNA。
1、IVT sgRNA合成服务(aRGEN) 包括设计、脱靶搜索和合成 提供50 ug sgRNA,冻干形式 注射/转染准备就绪 琼脂糖凝胶中确认的质量/数量 时间线:2周 2、sgRNA载体合成服务(dRGEN) 包括设计、脱靶搜索和合成 提供sgRNA和Cas9的表达质粒 时间线:2周 可在CMV或EF1a启动子下共表达GFP/HygroR和RFP/PuroR盒的Cas9载体供...
请指定靶向DNA序列的20个碱基,艾基生物提供对应的sgRNA。sgRNA合成采用体外转录法,具有生物相容性好、纯度高、活性高的优点,并且可以扩大到g级合成。一次反应可获得>100ug sgRNA。合成周期3个工作日。 艾基生物的sgRNA订制合成专为高要求的基础研究及临床转化而设计,具有超低的内毒素含量(达到人注射用标准),是进行科研...