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8. 考马斯亮蓝G250染色液:称100mg考马斯亮蓝G250,溶于200ml蒸馏水中,慢慢加入7.5ml 70%的过氯酸,最后补足水到250ml,搅拌1小时,小孔滤纸过滤。 SDS-PAGE凝胶的有效分离范围 丙烯酰胺浓度(%) 15 12.5 10 7.5 5.0 线性分离范围 15-435kDa 15-60kDa 18-75kDa 30-120 kDa 60-212 kDa 器材 电泳仪,电泳槽...
大部分的蛋白质在PH8.3的电极缓冲液中带有的是负电荷,所以表面电荷越多的蛋白质泳动的速度越快。 有效分离范围主要取决于丙烯酰胺的浓度和交联度,在没有胶黏剂的时候,丙烯酰胺只能聚合形成粘稠的溶液,经过双丙烯酰胺交联后才能使凝胶产生刚性和伸展性,形成SDS复合物必须通过的空隙,这些空隙的大小可以随着双丙烯酰胺和...
聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)是一种利用分子量差异分离蛋白质的分析方法。 对凝胶中的蛋白质进行电泳时,由于小分子的蛋白质可以较快地通过凝胶网孔,从而能够按分子量的顺序分离蛋白质。通过凝胶网孔的速度不仅受到每个蛋白质分子量的影响,还受到高级结构以及...
SDS-PAGE将蛋白质按大小分离,Western Blot用于识别特定的蛋白质。先进行凝胶电泳再进行wb,SDS-PAGE是最常用的凝胶电泳方法 2021-06-11 00:428 你是甜甜吗你超甜 我的天哪太赞了,清楚明了, 2021-11-16 16:54 2 有志气的老妖 感谢分享,讲得太清楚了 ...
WB大致流程为:SDS-PAGE电泳→转膜→一抗孵育→二抗孵育→显色。SDS-PAGE电泳在上期已详细介绍,本期将详细介绍其余实验步骤及注意事项。 图1 WB实验流程示意图 一、转膜 这一步是将蛋白质转移至固相载体上,常用固相材料有NC膜、PVDF膜等。常用湿法或半干法转模。这一实验步骤中要戴一次性PE手套,防止手上的蛋白...
SDS-PAGE是下列哪种实验方法的简称A.变性聚丙烯酰胺凝胶电泳B.非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳C.变性琼脂糖凝胶电泳D.非变性琼脂糖凝胶电泳搜索 题目 SDS-PAGE是下列哪种实验方法的简称 A.变性聚丙烯酰胺凝胶电泳B.非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳C.变性琼脂糖凝胶电泳D.非变性琼脂糖凝胶电泳 答案 A 解析...
SDS-PAGE凝胶制备属于实验室最常规的操作了,刚开始做蛋白实验总是在找凝胶配制实验中所用试剂的配方,这里总结了分离胶、浓缩胶、分离胶和浓缩胶缓冲液、考马斯亮蓝染液、样品缓冲液、电泳缓冲液等配方。 1. 分离胶(12%) 配制 所需试剂 所需体积 分离胶(12%) ...
一、实验简介 蛋白质的纯度鉴定可通过SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法。利用SDS-PAGE电泳方法或毛细管电泳法(CE-SDS)提供了最简单、成本最低,并且在确定样品中蛋白质组分数目方面灵敏度最高的手段,因此最为常用。 SDS 凝胶电泳以及利用电泳测定分子质量和大小的方法 。这个方法都可以单独测定样品的纯度,方法的选择取决于希望...
胰蛋白酶能够消化膜蛋白的亲水性部分,但不能通过细胞的脂双层而进入细胞。根据这些特点,人们常用胰蛋白酶联合SDS-PAGE电泳方法来确定膜蛋白在质膜。根据下面的实验结果,确定这5种蛋白(P1-P5)在质膜上的分布情况: (1) 将完整细胞的膜蛋白抽提进行SDS-PAGE电泳,结果如下图A所示; (2) 将完整细胞置于胰蛋白酶溶液...