SDS-PAGE检测蛋白纯度和分子量protocol 一、实验目的 掌握蛋白类药物SDS-PAGE法检测分子量和纯度的原理和方法。二、实验原理 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(简称SDS-PAGE),也叫变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种含有蛋白变性剂SDS(十二烷基硫酸钠)的常用电泳技术,常用于检测蛋白质。聚丙烯酰胺...
四、实验步骤 1.配液:根据用量,按照《附录:SDS-PAGE法检测分子量试剂配方》进行配制。 2.制胶 由于本实验目的蛋白约66±7kD,故选用10%分离胶。 垂直电泳槽的玻璃板清洗干净后,将凹型玻璃与平玻璃重叠,将两块玻璃板放入电泳槽支架内(短玻璃朝里),并将电泳槽支架在桌面水平轻轻磕几下,使玻璃板底部对齐,然后...
俗话说的好,工欲善其事必先利其器,SDS-PAGE凝胶就是我们想做好western blot要利的器,因为高质量的胶是跑出漂亮条带的重要前提之一。今天我把自己五年来摸索的经验分享给大家,希望你们都可以少走弯路。 一、SDS-PAGE 凝胶制备 1、玻璃板梳子的清洁 先用自来水浸泡5分钟,洗洁精清洗,注意厚玻璃板两侧沟槽容易残留...
1.配液:根据用量,按照《附录:SDS-PAGE法检测分子量试剂配方》进行配制。 2.制胶 由于本实验目的蛋白约66±7kD,故选用10%分离胶。 垂直电泳槽的玻璃板清洗干净后,将凹型玻璃与平玻璃重叠,将两块玻璃板放入电泳槽支架内(短玻璃朝里),并将电泳槽支架在桌面水平轻轻磕几下,使玻璃板底部对齐,然后插入斜插板到适...
掌握蛋白类药物SDS-PAGE法检测分子量和纯度的原理和方法。 二、实验原理 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(简称SDS-PAGE),也叫变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种含有蛋白变性剂SDS(十二烷基硫酸钠)的常用电泳技术,常用于检测蛋白质。 聚丙烯酰胺凝胶是由一定量的丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合成的三维...
掌握蛋白类药物SDS-PAGE法检测分子量和纯度的原理和方法。 二、实验原理 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(简称SDS-PAGE),也叫变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种含有蛋白变性剂SDS(十二烷基硫酸钠)的常用电泳技术,常用于检测蛋白质。 聚丙烯酰胺凝胶是由一定量的丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合成的三维...
掌握蛋白类药物SDS-PAGE法检测分子量和纯度的原理和方法。 二、实验原理 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(简称SDS-PAGE),也叫变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种含有蛋白变性剂SDS(十二烷基硫酸钠)的常用电泳技术,常用于检测蛋白质。 聚丙烯酰胺凝胶...
聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)是一种利用分子量差异分离蛋白质的分析方法。 对凝胶中的蛋白质进行电泳时,由于小分子的蛋白质可以较快地通过凝胶网孔,从而能够按分子量的顺序分离蛋白质。通过凝胶网孔的速度不仅受到每个蛋白质分子量的影响,还受到高级结构以及...
1、清洗玻璃板一只手扣紧玻璃板,另一只手蘸点洗衣粉轻轻擦洗。两面都擦洗过后用自来水冲,再用蒸馏水冲洗干净后立在筐里晾干。2、灌胶与上样(1)玻璃板对齐后放入夹中卡紧。然后垂直卡在架子上准备灌胶(操作时要使两玻璃对齐,以免漏胶)。垂直电泳槽(2) 按前面方法配1
1.SDS-PAGE法的基本原理 SDS-PAGE法利用SDS(十二烷基硫酸钠)对蛋白质进行解性和变性处理,使其带有负电荷,并通过电场力使蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中迁移。根据蛋白质分子量与迁移距离之间的关系,可以推断出蛋白质的相对分子量。2.SDS-PAGE法的步骤 (1)样品准备:将待测蛋白质样品进行解性和变性处理,并添加...