将凝固的胶板装入电泳槽内，并在电泳槽内加入SDS-PAGE电泳缓冲液，把胶浸泡一段时间，时间越长越好（防止梳子与胶相连，或胶因湿度不够而萎缩）；（6）点样时，再把梳子拔出来，拔时动作要轻，防止胶齿被拔断。二、SDS-PAGE电泳1、调胶：拔掉SDS胶上的梳子，并用小针调整齿的位置（使它们都平行）。2、点...
从电泳装置上卸下玻璃板,用小铲子剥下凝胶后切除一角以标注凝胶方位。 染色: 将凝胶浸泡在染色液中,置于摇床上染色4hr,染色液可回收重复利用。 脱色: 染色结束后,将凝胶浸泡在脱色液中,置于摇床上脱色过夜,其间更换脱色液3次. 记录: 将显示蛋白条带的凝胶用凝胶成像仪拍照,记录试验结果,并根据分子质量标准品...
对于有沉淀离心之后上上清的样品。 电泳缓冲液加满,进行电泳 三、电泳 注意正负极的连接,可以采用80V的电泳 观察到经过一段时间的电泳,蛋白的样品已经跑到了浓缩胶与分离胶的界面上。这个时候电压改成110V,继续电泳,直至条带跑到电泳板的底部 四:染色与脱色 凝胶放在染色液中染色,该步骤在摇匀板上完成 转到脱色液...
从电泳装置上卸下玻璃板,用小铲子剥下凝胶后切除一角以标注凝胶方位。 染色: 将凝胶浸泡在染色液中,置于摇床上染色4hr,染色液可回收重复利用。 脱色: 染色结束后,将凝胶浸泡在脱色液中,置于摇床上脱色过夜,其间更换脱色液3次. 记录: 将显示蛋白条带的凝胶用凝胶成像仪拍照,记录试验结果,并根据分子质量标准品...
1. SDS-PAGE电泳完成后,取出凝胶,去离子水漂洗1次。 2. 取出凝胶到合适的塑料盒中,加入染色液浸没凝胶,室温摇床上染色30min。 3. 观察染色蛋白条带,取出染好色的凝胶,转移到新的塑料盒中,去离子水漂洗至条带清晰后,可以进行观察和拍照。染好色的凝胶可以保存在去离子水中。 4. 使用过的染色液,可以回收使用...
一、SDS-PAGE凝胶电泳原理 SDS-PAGE凝胶电泳是将蛋白样品加入样品处理液(SDS和巯基乙醇)中,并进行高温加热处理,使蛋白变性,多肽链内部和肽链之间的二硫键打开,使肽链呈现开放状态。打开的肽链通过疏水作用与SDS结合,带有负电荷,在电场的作用下向正极迁移。由于不同大小的肽链在迁移过程中受到的阻力不同,它们逐渐分离...
SDS-PAGE电泳操作流程—含考染银染碘染.docx,1 SDS- 操作流程——考染 1、预备溶液 30% 30%聚丙烯酰胺溶液 30%〔w/v〕Acrylamide 【组分浓度】 各种组分名称 各种组分名称 30%Acr-Bis(29:1) 29%Acrylamide( 丙烯酰胺) 1%BIS(N,N’-亚甲丙烯酰 胺) 配制不同体积所需各成分的
(1)考马斯亮蓝法,在SDS-PAGE后,凝胶的固定和染色时间应比常规PAGE的长1倍左右,或用多倍体积染色液染色,以排除SDS的影响。 (2)银染法,在电泳后染色之前,必须将凝胶多次漂洗,以除去SDS。 4.影响分离结果的因素 缓冲系统 在SDS对蛋白质的助溶作用以及负电荷的包裹作用影响下,蛋白质的分离仅依据亚基的分子大小,...
1、垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质一、实验目的学习SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDSPAGE)测定蛋白质的分子量的原理和基本操作技术。二、实验原理蛋白质是两性电解质,在一定的pH条件下解离而带电荷。当溶液的pH大于蛋白质的等电点(pI)时,蛋白质本身带负电,在电场中将向正极移动;当溶液的pH小于蛋白质的等电点时...
使用方法: 1、 将电泳后的 PAGE 胶取下放入塑料容器中,加入适量染色液(以刚刚覆盖过胶面为适)。 2、 摇床上常温摇动10-20分钟。 3、 观察结果。 特点 · 1.室温下10min内可显现蛋白条带,无需脱色。 · 2.无毒无刺激气味。 · 3.灵敏度高,ng级蛋白,条带清晰。 注意事项: 1、常规染色所需的漂洗...